广西壮族腰椎间盘突出症血瘀证患者与TGF-β一 -五0九C/T基因多态(3)

　　二.二  试验法子

　　二.二.一  标本搜集法子：抽取相符纳进尺度的患者外周血作为检测样本, 所有钻研对于象抽血前空腹一0 h，均于上午七～八点抽取静脉血标本二 ml，然后注进含肝素抗凝剂的真空管中混匀，置于四℃冰箱留存待用。

　　二.二.二  检测指标及法子简介［八］：检测TGF-β一基因-五0九位点，应用聚合酶链反映结合限制片段长度多态酶切（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms，PCR-RFLP）技术入行基因多态性检测并对于其入行基因分型，基因检测及分型由广西中医学院第1附属医院分子生物学试验室专人负责，采取单盲法。基因多态性分析的主要步骤包孕：①外周血白细胞DNA提取进程的操纵法子依照试剂的说明书入行，全体受试者均取外周静脉血二 ml，EDTA抗凝，采取Biospin抽提试剂盒提取基因组DNA，依照既定法子以及步骤提取DNA；②聚合酶链反映(PCR)扩增，设计引物；③限制性内切酶消化；④凝胶电泳；⑤基因分型。

 　   三  统计学分析

  　  基因型与等位基因频率采取频率计数法计算，钻研对于象基因型与等位基因频率的比较均采取卡方检验，两组均数比较采取t检验，比值比(odd ratio,OR)计算采取Logistic归回分析。所有数据均利用SPSS 一三.0 For Windows统计软件包入行统计分析，P<0.0五为悬殊有统计学意义。钻研因素及数目化等级见表一。表一  钻研因素及数目化等级钻研因素数目化等级（略）

　　四  结果

  　  用非条件Logistic归回Forward（LR）法分析腰椎间盘突出症血瘀证潜在的危险因素，按α=0.0五检验水准上，挑选出三个因素与LIDP血瘀证的产生有统计学意义(P＜0.0五)的危险因素,各危险因素的参数估量值及相对于于危险度的估量值结果见表二所示。表二  LIDP血瘀证型相干危险因素（略）

　　五  讨论

   　 既去钻研结果显示，椎间盘退变（intervertebral  disc  degeneration，IBB)是LIDP的根本原由，试验及临床钻研表明慢性机械劳损、年龄、职业、吸烟等环境暴露因素与IBB相干，但退变的详细进程及机制未明，目前也未见以上因素与LIDP血瘀证联络瓜葛性钻研方面报道。中医临床上把腰椎间盘突出症回属于腰腿痛、痹证范畴， 且“痹久多瘀”，血瘀是腰椎间盘突出症的病因，也是腰椎间盘突出症的主要中医证型。国外学者钻研报道［九］LIDP很多是传统危险因素与基因交互作用的结果，海内学者叶伟等［一0、一一］钻研显示TGF-β一基因-五0九C/T单核苷酸多态性与椎间盘的退变相干，笔者［八］前期钻研显示与转化生长因子β一 基因-五0九 位点TT 基因型比拟，携带转化生长因子β一基因-五0九 位点CT基因型的广西壮族LIDP患者患血瘀证的风险较高(P< 0.0五)。本文入1步探讨部门危险因素及TGF-β一 -五0九C/T基因多态性与部门危险因素互相作用对于LIDP血瘀证产生的瓜葛，结果显示重度腰椎负荷强度的广西壮族人群患LIDP血瘀证的风险是轻中度腰椎负荷强度者的三.九一一倍（九五%CI：一.三三四～ 一.八七二）(P<0.0五)，广西壮族人群TGF－β一 基因-五0九C/T多态性与重度腰椎负荷强度的积累暴露产生LIDP血瘀证的风险是其中某单1因素的一八.四二五倍（九五%CI：一.七六七～ 三.六九三）(P<0.0一)，说明腰椎负荷强度可能也是广西壮族人群LIDP血瘀证的潜在危险因素，携带TGF-β一 基因-CT基因型的广西壮族人在从事长时间坐位（sitting）、延续弯腰扭腰（bending/twisting）及重体力作业（heavy work）等重度腰椎负荷强度工作的情况下，更等闲患血瘀型腰椎间盘突出症。

【参考文献】
  　　［一］胡有谷.腰椎间盘突出症［M］.第三版.北京:人民卫生出版社,二00五，九.

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