6-BA对中国石竹雄性不育植株离体保存的影响(2)

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  1.2.4生根诱导。经过继代增殖的不定芽生长至3~4 cm高时,将粗壮的茎段切成具1~2个节的茎段,转接于生根培养基中,促进其生根。20 d后观察统计苗的生根情况。 
  1.2.5试管苗的移栽。生根诱导25 d后开瓶炼苗7 d,即可进行移栽。选取健壮的试管苗,洗净其根部附着的培养基,移栽到含营养土的营养钵中。移栽前基质采用高温灭菌,栽后浇透水放于人工控温箱中,保持湿润。培养14 d可将移栽苗从人工控温箱中取出,在自然条件下加强阳光照射14 d,随后移入花盆定植于室外大棚中,盆土选择通透性好的泥炭土。定植后应立即浇透水,观察记录成活株数。 
  1.2.6田间管理与育性观察。将试管苗定植于花盆中10 d左右,浇1次肥水。在其花期阶段,观察移栽苗的生长特性和开花后育性,并确定其不育性状的遗传稳定性。 
  1.3数据处理与统计 
  诱导率(%)=对于百分数的数据,在进行方差分析之前将其转换成平方根的反正弦。试验数据通过SAS软件进行方差分析和0.05水平下的LSD测验,以判断各处理间的差异显著性,从而筛选出各阶段最适宜的培养基或移栽基质。 
  2结果与分析 
  2.1芽的诱导 
  外植体培养7 d左右腋芽开始萌发,并且生长较快,20 d时对芽分化率和外植体平均出芽数进行记录,因无论使用哪种培养基,每个外植体的芽分化率均为100%,故只对外植体平均出芽数进行方差分析。由表3可知,6-BA浓度间的处理存在极其显著的差异,而品种间则无显著差异。 
  由表4可知,处理A1诱导出的不定芽较健壮,但数量较少;处理A2外植体平均出芽数最高,出芽快且苗生长健壮,基本无玻璃化现象产生;处理A3诱导出的苗容易发生玻璃化,从而减少了有效苗的数量。因此,6-BA在1.0 mg/L时是最适宜的浓度水平。 
 2.2茎段的继代增殖 
  由表5可知,6-BA浓度间的处理存在极其显著的差异,而品种间则无显著差异。 
  6-BA的浓度在0.1~0.5 mg/L的范围内均可以诱导腋芽萌动,但在不同浓度的6-BA的作用下,芽的生长状况差异很大。由表6可知,处理B1芽的增殖倍数最低,且容易产生玻璃化;处理B3芽的增殖倍数最高,分枝能力最强,但是其增殖产生的小苗生长细弱,且容易产生愈伤组织;处理B2小苗生长健壮,畸形化现象少,且处理B2、B3间无显著差异。故6-BA浓度为0.3 mg/L时,是最适合中国石竹快繁继代增殖的培养基[5]。 
  2.3试管苗的移栽 
  培养7 d左右茎段切口处开始膨大,渐渐出现浅黄色的瘤状突起(根原基),14 d后白色的根开始萌发伸长,25 d左右根可长至3.5~5.0 cm,呈辐射状,有须根。将生根后的试管苗移栽至栽培基质中培养。 
  移栽基质也是影响移栽成活率的重要因素之一[6],尤其对草本植物的影响较大。在保持空气湿度的条件下,珍珠岩能给根系提供良好的通气条件,可以防止杂菌污染,且因中国石竹喜阳光、高燥、通风、凉爽环境,性耐寒,忌湿涝和黏土,故珍珠岩为中国石竹移栽最适宜的基质。 

  2.4育性观察 
  试管苗移栽生长20~30 d后上盆或定植,30 d左右即可开花。在开花期观察再生苗的花器官形态特征,发现其花色从初花期到盛花期由深变浅,所有花器官形态在花萼、花瓣方面与其他可育植株没有差异,而二叉雌蕊(少有3叉雌蕊)比可育植株的长、粗壮且张开角度大,从外观看完全无雄蕊;将花朵纵向切开后可以看到,雄蕊的花丝短缩在花冠筒内,无花药,或虽有花药但花药中无花粉粒,或者只有少数干瘪的花粉粒。由此可确定其全部为雄性不育植株,保持了原材料的不育性状。 
  3结论与讨论 
  3.16-BA对中国石竹茎段腋芽分化的影响 
  对大量植物的组织培养研究表明,细胞分裂素中应用最多的是6-BA,用量一般为1.0~2.0 mg/L最适宜。该试验表明,中国石竹其腋芽分化所需的6-BA的浓度较低,仅1.0 mg/L,而增殖只需要0.3 mg/L,且芽生长较健壮,增加6-BA的浓度反而会抑制芽的生长,甚至导致变态芽的发生[7]。 

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