遗传学实验——微核(5)

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次脱水,最后换70%的乙醇,在冰箱内4°C保存。用蒸馏水冲洗保存的根尖 2 次后,将根尖用1N盐酸放入恒温箱解离 10~15 min,然后用蒸馏水漂洗2次,切取根尖分生区置于载玻片上,加改良苯酚品红溶液,同时用镊子捣碎。染色10~15 min ,进行常规压片。每个处理至少观察3个根尖,每个根尖至少观察1 00个左右细胞。用显微镜摄像系统拍摄,观察细胞核畸变类型及统计在一个视野中的微核数目。

2 结果与分析

紫外线照射对分裂期细胞核的影响结果:1.当照射0 min时,细胞基本上都处于正常状态(图1)。当照射时间增加至15min时,有不规则形状的细胞核出现(图2)。当25min处理时,视野中微核的数量和15 min 处理相比,细胞核畸变微核类型明显增多(图3)。当照射时间继续延长至45 min ,出现的多核现象比25 min 处理约增加1倍,此时,细胞核的各种畸变类型非常容易观察,轻轻挪动显微镜视野,很快就会找到各种畸变细胞核。照射65min时,微核和多核现象也有所减少。此时细胞核中染色体分裂紊乱,出现多级分裂现象(图4)。 在有丝分裂中期、后期和末期都能观察到细胞核分裂后形成的微核,中期和后期中最为常见。在后期和末期观察到细胞核多核,在后期中最为常见。 综合分析,紫外线的照射时间与细胞核的损伤程度呈正比,紫外线处理45 min时总微核数最高,各种畸变类型的细胞核也达到最高或相对较高。因此45 min 处理是观察细胞核畸变的最佳处理。

3 讨论

紫外线最有效的诱变波长是260 nm,这正是DNA分子的吸收波长[4].在 DNA分子强烈地吸收紫外线后,细胞核会发生畸变,因而在大蒜根尖细胞中观察到多种畸变现象。微核不含着丝点,最终会被排斥在新的子核之外,造成遗传物质的丢失。微核主要来源于染色体断片、落后染色体,以及间期细胞核的破碎

[5]。多核可能主要是细胞核的破碎形成的.本研究结果表明,紫外线照射大蒜根

尖细胞25 min ,适于观察分裂期的畸变,照射 45 min 适于观察间期核的畸变,

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