细胞及遗传学实验

细胞及遗传学实验

目 录

实验一 细胞膜的渗透性………………………………1 实验二 细胞凝集反应……………………………........2 实验三 巨噬细胞吞噬现象的观察……………………3 实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察…………6 实验五 DNA的Feulgen染色法..................10 实验六 动物染色体标本的制备与观察………………12 实验七 植物染色体标本的制备与观察………………15 实验八 联会复合体的染色与观察................17 实验九 果蝇的形态和生活史观察………………….....18 实验十 果蝇唾腺染色体标本的制备与观察………….21 实验十一 人体X～染色质（巴尔小体）的观察.......22 实验十二 人体外周血细胞培养及染色体制备和观察….24

实验一 细胞膜的渗透性

实 验 目 的

了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。

实 验 原 理

将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于溶质透入速度互不相同。

实 验 用 品

一、器材

50ml小烧杯，10ml移液管，试管（1～10ml）,试管架。 二、氯化试剂

0.17mol/L 氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸胺、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮。

三、材料 兔血。

实 验 方 法

一、兔血细胞悬液

取50ml小烧杯一只，加1份兔血和10份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的兔血。

二、低渗溶液

取试管一支，加入10ml蒸馏水，再加入1ml稀释的兔血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。

三、兔红细胞的渗透性 1．取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？

2．取试管一支，加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入稀释兔血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。

3．分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验。步骤同2。

实 验 结 果

将观察到的现象列入表6-1，对实验结果进行比较和分析。

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表6-1 不同低渗溶液下的溶血现象 试管编号 是否溶血 时间 1．10ml氯化钠+1ml稀释兔血 2．10ml氯化铵+1ml稀释兔血 3．10ml醋酸胺+1ml稀释兔血 4．10ml硝酸钠+1ml稀释兔血 5．10ml草酸铵+1ml稀释兔血 6．10ml硫酸钠+1ml稀释兔血 7．10ml葡萄糖+1ml稀释兔血 8．10ml甘油+1ml稀释兔血 9．10ml乙醇+1ml稀释兔血 10．10ml丙酮+1ml稀释兔血

结果分析 实验二 细胞凝集反应

实验原理

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化 ，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。

凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

实验用品

1. 土豆块茎。

2. 显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。 3.PBS缓冲液

称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 0.43g、加蒸馏水，定容至1000ml,调PH值到7.2. 4.2％的红细胞

以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞液。

实验方法

1. 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。

2. 用滴管吸取土豆凝集素和2％红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，精

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致20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。 3. 以PBS液加2％血细胞液作对照试验。

作业

简图表示血细胞凝集原理

实验三 巨噬细胞吞噬现象的观察

实 验 目 的

一、观察巨噬细胞吞噬全过程和意义。

二、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。

实 验 原 理

细胞吞噬作用原来是单体细胞动物摄取营养物质的方式，也是原始防御作用。随着动物界的进化，在高等动物中，则发展生成大小两类吞噬细胞（即巨噬细胞和嗜中性粒细胞），专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要组成部分。 巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后进入血液到达各组织内，并进一步分化为各种巨噬细胞。当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动，主动向病原体或异物移行，在接触到病原体或异物时，即伸出伪足将之包围并内吞入细胞，形成吞嗜体，继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合形成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶作用下，将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化的残渣排除细胞外。

实 验 用 品

一、器材

显微镜，解剖盘，剪刀，镊子，载玻片，盖玻片，注射器，吸管，吸水纸 二、试剂

1、0.85%生理盐水（0.85g氯化钠溶于100ml蒸馏水中）

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2、alsever溶液

葡萄糖 2.05g 柠檬酸钠 0.89g 柠檬酸 0.05g 氯化钠 0.42g 蒸馏水 100ml

调ph至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10分钟，置4摄氏度冰箱保存 0.4%台盼蓝染液（台盼蓝染粉 0.4g，0.85%生理盐水） 4.0%淀粉肉汤（含台盼蓝染液） 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1.0g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml

加热后加入可溶性淀粉6.0g，促使溶解，再煮沸灭菌，置4摄氏度冰箱保存。用时水浴融化，加入适量台盼蓝染液混匀，使呈蓝色。 三、 1、 小白鼠

2、 1%鸡红细胞悬液。

自健康鸡翼静脉采学1ml，放入盛有4ml alsever溶液瓶中，混匀置4摄氏度冰箱保存备用。使用前加入0.85%生理盐水离心（1500r/min 10min）洗涤两次，再用生理盐水配成1%浓度悬液。

材料

实 验 方 法

一、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝）1ml。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实验台上，用左手的拇指食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾与后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后1/2处的一侧注射，进针勿过深，否则易损害肝及血管等，造成出血致死。

二、实验时，每组去一只注射过淀粉肉汤的小白鼠，腹腔注射1%鸡红细胞

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