hcy临床方案乌鲁木齐

同型半胱氨酸测定试剂盒

（酶法）

临床试验方案

临床试验负责人（签名） ： 临床试验机构（盖章） ： 统计学负责人（签名） ： 统计学负责人单位（签章） ：

产品注册申请人（盖章） ： 北京

有限公司

一、 临床试验背景 同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法）用于定量测定人体血清或血浆中同型半胱氨酸的含量。 同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）又称高半胱氨酸，是蛋氨酸去甲基后形成的一种含硫氨基酸，属于蛋氨酸循环的中间产物。有关其代谢紊乱的报道最早来源于先天性胱硫醚合成酶缺乏导致出现同型半胱氨酸尿患者的观察。此后，又相继发现其他几种参与HCY代谢的酶或辅酶改变所引起的代谢紊乱。近几年来，随着测定技术方法的改进，已经能够对正常人血浆中以各种形式存在的HCY进行测定，并且发现在心、脑及外周血管疾病、慢性肾功能不全、牛皮癣、维生素B12缺乏等疾病的患者中存在HCY的代谢紊乱。对同型半胱氨酸的研究始于20世纪70年代，1969年首次提出高同型半胱氨酸血症可致动脉粥样硬化并可形成血栓后，人们逐渐发现人体血清中同型半胱氨酸的含量与冠心病、脑血管疾病、外周血管疾病和静脉血栓的发生和发展有着密切的关系，而且随着同型半胱氨酸含量的增加发生血管疾病的危险也呈递增趋势。 高同型半胱氨酸通过氧自由基介导引起血管内皮损伤，不同浓度的血清Hcy还可通过抑制内皮细胞DNA的合成，影响内皮功能及细胞形态改变，并促使血管平滑肌细胞增殖，导致动脉粥样硬化。血清Hcy可使血小板受损，使血小板的黏附性和聚集性增加。血清HCy尚能改变花生四烯酸代谢，使血栓素A2合成增加，血栓素A2具有收缩血管和促血小板聚集的作用。血清Hcy还通过抑制凝血酶调节蛋白在内皮细胞表面的表达及活性，进一步抑制蛋白C的激活，影响凝血酶的灭活。血清Hcy还能增加组织因子的活性，激活凝血酶，导致血管系统的血栓少形成。 目前越来越多的资料显示 Hcy与脑血管病有着紧密的联系。甚至有人认为Hcy水平升高是脑血管病的一项独立危险因素和重要危险因子。研究分析表明，随着血浆Hcy水平的增高，患缺血性脑血管病的相对危险度逐渐增加，与非Hcy患者相比，Hcy患者患缺血性脑血管病相对危险度增加。此外，研究还发现，不论是缺血性脑血管病患者，还是脑梗死和TIA患者，其血浆Hcy水平均高于对照组，提示Hcy水平升高可能与缺血性脑血管病的发病密切相关。脑梗死与TIA患者血浆Hcy水平相比无显著性差异，表明Hcy水平与缺血性脑血管病的类型可能无关。 北京 公司的同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法）研发工作已完成，为了验证该试剂盒在临床应用上的适用性和准确性，现开展临床验证工作。 二、产品原理、特点及试验范围 1、机理 同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化成正比。 2、特点 液体双试剂，开瓶即用，具有操作简单、快速、微量、特异性好和精密度高等优点，可应用于全自动或半自动生化分析仪。 3、试验范围 样本为新鲜血清或血浆（肝素抗凝）。请采血后立即离心分离血浆，或冷藏保存1h内分离，离心后的样本在室温下可稳定4天，0℃～2℃可稳定数周，－20℃下可稳定数月或数年。 三、产品的适应症： 高HCY水平可导致动脉血管壁内皮片状脱落，同时刺激平滑肌细胞增生，引起血管损伤，出现类似动脉粥样硬化性病理改变。同时高HCY还会增大冠心病、中风、高血压、老年痴呆等疾病的危险性。 四、临床试验的项目内容和目的 项目内容：选择已批准上市的同型半胱氨酸测定试剂盒与本试剂盒进行对比试验。 项目目的：（1）与对照试剂同时测定正常人和病理值标本的同型半胱氨酸，对临床试验结果进行统计学分析，证明本试剂与对比试剂具有等效性。（2）通过临床试验对临床前制定的各项指标进行修正，发现或预测在实际应用中遇到的问题，在说明书中提醒用户注意。 五、总体试验设计（包括成功和失败的可能性分析） （一）试验机构： （二）试验方法：选择已批准上市的同型半胱氨酸测定产品与本品对临床样本进行对比试验。如果对同一份血清样本，双方试剂检测结果一致时，认同检测结果。如果对同一份样本检测结果不一致，需根据选用第三种试剂或方法进一步检测，结果遵从多数原则。 1、临床试验所用的试验材料 1) 临床试验研究产品 名称：同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法） 来源：北京 有限公司 规格：R1-66ml，R2-18ml 效期：12个月 保存条件：2-8℃ 2) 对比用已批准上市的同类产品 名称：同型半胱氨酸测定试剂盒（循环酶法） 来源：北京九强生物技术有限公司 规格：R1：2×20ml，R2：1×7ml，R3：1×6ml 效期：12个月 保存条件：2-8℃ 批准文号：国食药监械(准)字2006第3400161号 3）如果在临床试验过程中出现对比试验测定结果不符的样本，应采用金标准或其他方法再次进行确认试验，以便对临床结果进行分析。 4）仪器设备：雅培Aeroset2000型全自动生化分析仪。 2、试验成功与失败的可行性分析 在整个试验过程中，对操作人员的临床经验和操作技能有专业要求，必须精确掌握临床检验规程和制度，严格按照产品说明书进行操作，本产品临床试验即可成功。 本试验进行过程中如果保存条件不当或者出现其他非预期的产品性能变化，再或者操作不当等都可能导致检测结果的严重偏离，出现这种情况不要急于认定试剂本身出现质量问题，应当认真分析整个试验过程，确保过程及操作无误后进行重复试验，以得到正确的结果。上述风险可通过使用前严格的产品检查和有经验的医生操作降至最低。 3、临床试验质量控制 1） 严格按照产品说明书进行操作，确保试验结果准确。 2） 在每次试验中都检测质控血清，测定值应在规定范围之内。 3） 临床试验应指定专人负责，操作者应具备相应的试验技能。 4、试验报告要求 临床试验研究结束之后，实施临床试验单位应按照要求出具临床试验报告，并加盖实施临床试验单位公章。临床研究报告至少应包括产品名称，生产单位，产品批号，试验单位，试验日期，试验方法、结果及结论。 六、临床评价标准 1．产品性能 产品性能测定结果应达到下述要求： （1）空白吸光度 以蒸馏水为检测样本时，吸光度应不小于0.800A。 （2）试剂空白吸光度变化率 以蒸馏水为检测样本时，每分钟吸光度变化值(△A/min)的绝对值应不大于0.100A。 （3）灵敏度 Hcy含量为10umol/L时，测定吸光度变化率(减掉试剂空白吸光度变化率) △A ≥0.002Abs/min。 （4）准确性 以Roche或Randox等公司质控物为标本，测定值在给定的范围内。 （5）线性范围 在0-50umol/L范围内，用高值标本进行系列稀释，配制5个不同浓度的标本（浓度在0-50umol/L范围内），计算相关系数（r）≥0.990。 （6）精密性（批内精密性）

同一批号的试剂分别测定高、低值两个标本，每个标本重复测定10次，分别计算变异系数CV，应均不大于8.0%。 2．参考值验证 （1）正常标本和病理标本的测定结果均应与相应项目的参考值相符，如有不相符的标本出现，且超过一定的医学决定水平，应采用其他方法或第三方试剂再次进行确认试验，结果遵从多数原则。 （2）统计本试剂与对照组试剂对样本的测定值，计算相关性；对两组结果进行统计学分析，应无统计学差异。 七、临床试验持续时间及其确定理由 该产品为检测用体外诊断试剂，不存在试验病例的观察周期；操作简便，快速，在被检样本准备充足的情况下，几个小时内即可完成；或者根据该产品及标本的要求可以随时检测，因此临床试验持续时间取决于临床医院病理收集情况。 根据医院内住院病人和门诊流量情况，认为30天内可以完成样本的检测。 八、临床试验例数及其确定理由 依据《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》确定每家临床医院样本数为100例，且具有统计学意义。 正常组：70例以上正常人样本，性别不限，年龄不限。 疾病组：经临床诊断为患有动脉粥样硬化、冠心病等疾病的患者30例。 九、选择对象范围、选择对象数量及选择理由 为了体现结果的广泛性和代表性，考察性别、年龄等因素是否会对结果产生影响，我们选择不同性别和年龄段的受试者样本进行临床试验研究。 对照组的正常人并非指任何组织和器官的形态和功能都无异常的人，而是指各种生理指标正常波动，并排除患有动脉粥样硬化、冠心病等可能使HCY升高的患者。 疾病组为经临床诊断确认为患有动脉粥样硬化、冠心病等可能使HCY升高的患者。 十、不良反应预测及应当采取的措施 本品作为体外诊断试剂，不直接接触人体，仅对血清或血浆标本进行检测，但其检测结果间接影响临床医生的诊治。因此我们对合格产品在按要求使用中出现的预期之外的境况作为不良反应进行预测： （1） 如果保存条件不当或者出现其他非预期的产品性能变化，甚至使用过期产品可能导致检测结果的严重偏离； （2） 试验操作人员操作不当等也可能导致检测结果的严重偏离； 采取的相应措施：在整个实验过程中，对操作人员的临床经验和操作技能有专业要求，必须经过培训、精确掌握临床检验规程和制度，严格按照产品说明进行操作；另外我们还对上述可能发生的不良反应在说明书中明确提示，将上述风险降到最低。 十一、统计指标： 1．产品性能 （1）空白吸光度 统计以蒸馏水为检测标本时的吸光度值。 （2）试剂空白吸光度变化率 以蒸馏水为检测样本时，每分钟吸光度变化值(△A/min)的绝对值。 （3）灵敏度 测定已知浓度的标本，记录反应前后吸光度差值，计算平均值，换算为10umol/L时吸光度差值。 (4) 准确性 以Roche或Randox等公司质控物为标本，记录测定值。 （5）线性范围 在0-50umol/L内，用高值标本进行系列稀释，配制5个不同浓度的标本进行测定,记录测定结果，计算相关系数r。 根据下列公式计算相关系数： n?XiYi??Xi??Yi[n?Xi?(?Xi)2]?[n?Yi?(?Yi)2]22r=式中： Xi—— 测定管溶液浓度的测定值； Yi—— 与测定管溶液浓度相对应的稀释比例； i —— 1,2,3,……,n； n —— 测定标本数。 （6）精密性（批内精密性） 同一批号的试剂分别测定高、低值两个标本，每个标本重复测定10次，记录测定值，分别计算两个水平的变异系数CV。 变异系数CV计算公式： ??Xi?X?/?n?1?2CV（%）= 式中： X ×100% Xi— 试剂测定标本结果的值； X — n次试剂测定结果的平均值； i — 1，2，3，……，n； n — 重复测定次数。 2．参考值验证 使用北京九强生物技术有限公司的试剂盒和北京 生物工程技术有限公司的试剂盒同时测定样本，记录测定结果，计算两组数据的相关性，并对两组数据进行T检验，检验两组数据间是否有统计学差异。 r?样本相关性检验:?(X?X)?(Y?Y)?(X?X)??(Y?Y)22 t?X1?X222X?X?1?2?(?X1)2?(?X2)2n T检验：十二、各方承担的职责： 1、临床申请单位职责： n(n?1)（1）与试验单位共同设计、制定临床试验方案并签署。 （2）向试验单位免费提供受试产品。 （3）负担与试验相关的各种费用。 2、临床试验单位职责： （1）与申请单位共同设计、制定临床试验方案，并签署。 （2）试验单位中止临床试验前，应当通知申请单位并说明理由。 （3）出具临床试验报告，并对报告的正确性及可靠性负责。 十三、临床试验人员： 姓 名 所在科室 检验科 检验科 检验科 在研究中的职责 临床试验负责人 统计学负责人 临床试验人员 十四、伦理考虑 本试验的对象范围是随机住院和门诊患者及体检者的血清样本以及实验室留存的特殊样本，其样本的采集并非专为临床试验而进行，样本的采集客观上不可能获得与受试者沟通的机会，该临床研究对受试者没有风险，因此无需提交伦理委员会审评。 十五、承担临床试验的医疗机构意见： ####### 医院（盖章） 年 月 日

十六、临床申请单位意见： 北京 有限公司（盖章） 年 月 日

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