新疆农业大学动物医学学院兽医传染病学实验
兽医传染病学实验报告册
目 录
消毒 .................................................................................................... 1 免疫接种 ............................................................................................ 3 病料的取材和送检 ............................................................................ 5 药物敏感试验 .................................................................................... 7 布鲁氏菌病检疫 ................................................................................ 9 新城疫的实验室诊断 ...................................................................... 12
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实验成绩 评阅老师 实验时间 年 月 日
消毒
（一）实验目的
1.结合生产实践掌握畜禽舍、土壤、粪便等消毒方法。 2.检查消毒质量的方法。 （二）内容及方法
1.消毒的器械包括 、 、和消毒剂包括 、 、 、 、 、 、 等。
2.喷雾器有两种，一种是 ，另一种是 。
3.漂白粉为次 ，是一种广泛应用的消毒剂，杀菌效力强。 乳剂用于畜、禽舍、环境的消毒，在 水中，可作饮水消毒。
4.福尔马林为38％～40％ 的水溶液，有较强杀菌作用。主要用于 消毒，用量为 空间。
5.畜、禽舍的预防消毒，每年可进行 。产房的消毒，在 应进行一次， 时进行多次， 再进行一次。畜、禽舍预防消毒时常用的液体消毒剂有10％～20％的 和5％～10％的 溶液。 （三）思考题
1.试述消毒的种类和意义。
2.分别列举适用于杀灭芽胞菌、非芽胞菌和病毒的化学消毒药。
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3.如何进行畜、禽舍消毒质量的微生物学检查?
4.分别举列高压灭菌和干烤灭菌的温度、时间和注意事项。
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免疫接种
（一）实验目的
1.结合生产实践掌握免疫接种的方法和步骤。 2.熟悉兽医生物制品的保存、运送和用前检查方法。 （二）内容及方法
1.免疫接种的方法很多，主要有 、 、 等。
2.注射免疫法中可分为 、 、 和 等四种。 3.皮下接种法对马、牛等大家畜皮下接种时，一律采用 部位，猪在 后方，家禽在 、 。
4.皮下接种的优点 5.皮内接种法马的皮内接种采用 、 部位。牛及羊除颈侧外，可在 或 部位。猪大多在 后。鸡在 部位。
6.皮内接种的优点 皮内接种的缺点 7.马、牛、猪、羊的肌肉接种，一律采用 和 两个部位。鸡可在 部接种。
8.肌肉接种的优点是 。 肌肉接种的缺点是 。 9.马、牛、羊的静脉接种，一律在 部位，猪在 部位。鸡则在 部位。10.静脉接种的优点是 。 静脉接种的缺点是 。 12.经口免疫法分 和 两种。
13.经口免疫法的优点是 。 经口免疫法的缺点是
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14.气雾免疫法分为 、 。
15.气雾免疫法的优点是 ，缺点是 。
16.兽医生物制品应保存在 、 、 的场所，灭活菌(死苗)、致弱的细菌性菌苗、类毒素、免疫血清等应保存在 ，防止冻结；致弱的病毒性疫苗，如猪瘟弱毒疫苗、鸡新城疫弱毒疫苗等，应置放在 ，冻结保存。
17.疫苗的运送要求 ， ，运送途中避免 和 。致弱的病毒性疫苗应放在 或 运送。
18.不能使用的疫(菌)苗应立即 ，致弱的活苗应 或 。 19.免疫接种前，应对家畜进行 ，根据检查结果，作如下处理：完全健康的家畜可进行自动免疫接种； 的家畜不能进行自动免疫接种，而应注射 ； 和 应注射治疗量的免疫血清或给予其他治疗。 （三）思考题
1.试述免疫接种在兽疫防治上的意义。
2.在免疫接种时应注意的哪些内容？
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病料的取材和送检
（一）实验目的
结合病例诊断工作，学会被检病料的采取、保存、包装和记录的方法 （二）内容及方法
1.凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)急性死亡时，必须先用显微镜检查其末梢血液抹片中是否有 存在。
2.内脏病料的采取，须于死亡后 ，最好不超过 ，否则时间过长，由肠内侵入其他细菌，易使尸体腐败，影响病原微生物的检出。
3.刀、剪、镊子、注射器、针头等 。器皿(玻璃制品、陶制品、珐琅制品等)可用 或 。软木塞、橡皮塞置于 。采取一种病料，使用一套器械和容器，不可混用。
4.应根据不同的传染病，相应地采取该病常侵害的 或 。为了避免杂菌污染，病变检查应待 完毕后再进行。
5.脓汁的采取过程： 6.淋巴结及内脏采取过程 7.血清采取过程： 8.全血采取过程： 9.细菌检验材料的保存，将采取的脏器组织块，保存于 或 中，容器加塞封固。
10.病毒检验材料的保存，将采取的脏器组织块，保存于 或 ，容器加塞封固，
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11.病理组织学检验材料的保存，将采取的脏器组织块放人 或 中固定。
12.病料的运送装病料的容器要一一 ， ，并附 。 （三）思考题
1.试述正确采取病料和运送病料的实际意义。
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药物敏感试验
一、实习目的
(1)熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判定方法。 (2)了解最低抑菌浓度试验的原理和方法。 (3)了解药敏试验在实际生产中的重要意义。 二、实验材料
菌种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌。药敏试纸 青霉素、链霉素、庆大霉素、
氯霉素、磺胺嘧啶等，分装于灭菌平皿中。95％酒精、小镊子、普通琼脂平板。 三、实习内容
药敏试验的方法有很多；普遍使用的有 ； ； 等。 1.圆纸片扩散试验
操作方法取一菌种，用 致密划线于琼脂平板表面(可重复来回划 线)，或用“十”字形划线法。用 将各种抗菌药物圆纸片，分别贴于培养 基表面，各片距离要相等(图8—1)。37℃ 培养24h观察结果。
结果判定根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小，来判断该菌对各种药物的敏感 程度，分为 、 、 和 四种。 抗菌素 青霉素（50ug/ml） 链霉素（500 ug/ml） 抑菌圈直径(mm) <10 无抑菌圈 结果 高度敏感 中度敏感 低度敏感 不敏感 高度敏感 红 庆 头 呋 青 磺氯 7
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氯霉素（700 ug/ml） 新霉素（300 ug/ml）
细菌对磺胺药物敏感度的标准，按 Hawking所定，若磺胺药物浓度在每毫升 即能抑制细菌生长者，则该菌对磺 胺药很敏感；如需每毫升 才能抑制 生长，为敏感；每毫升 始能抑制， 为中度敏感；每毫升超过 仍不 能抑菌者，则该菌系耐药性菌株。细菌 对不同抗生素的敏感度标准，见表： 2.最低抑菌浓度试验
原理：
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<10 无抑菌圈 <10 无抑菌圈 <10 无抑菌圈 中度敏感 低度敏感 不敏感 高度敏感 中度敏感 低度敏感 不敏感 高度敏感 中度敏感 低度敏感 不敏感 氯 磺新 青 头 红 庆 新疆农业大学动物医学学院兽医传染病学实验
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布鲁氏菌病检疫
（一）实验目的
初步掌握布氏杆菌病的细菌学、血清学诊断及变态反应等检疫方法。 （二）实验原理
（三）实验准备
抗原：使用时用 石炭酸生理盐水作 稀释，长霉或出现凝集块的抗原不能应用。 被检血清：必须新鲜，无明显蛋白凝固，无溶血现象和腐败气味。 阳性血清和阴性血清：由兽医生物药品厂生产供应。
稀释液：石炭酸生理盐水，用化学纯石炭酸与氯化钠配制，经高压灭菌后备用。 用具： （四）实验步骤 （一）布病试管凝集反应 1、牛血清稀释和加抗原的方法
单位：ml
管号 稀释度 生理盐水 血清 抗原 小试管 1 2 3 4 5 6(+) 7(-) 置37℃温箱中，培养22—24h，观察结果
2、比浊管配制方法
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试管号 1 2 3 4 5 抗原稀释(ml) 1:40 0 0.25 0.5 0.75 1.0 0.5%石灰酸生理盐水(ml) 1.0 0.75 0.5 0.25 0 清亮度% 100 75 50 25 0 判断（标记） （二）全部试管充分振荡后，置37℃温箱中22--24小时后，用比浊管对照并记录结果。 （五）结果分析
点状或圆盘状 可判断为 。
倒伞状沉淀则为 需 。
大动物 、 和 血清凝集价在 达++以上，则判定为 ；在 达++以上，则判定为 。
小动物 、 和 血清凝集价在 达++以上，则判定为 ；在 达++以上，则判定为 。 个人结果：
管号 结果 小试管 1 2 3 4 5 6(+) 7(-) 结果分析： （六）注意事项
1、每位同学做一个血清样品，并记下牛的编号（表格） 2、每小组只做一个阳性对照。
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3、阳性牲畜， ，可疑牲畜须于检测后 日进行第二次复检，如仍为疑似反应，则按 牲畜处理，如为 则视为健畜。 （七）思考题
1.疑似布氏杆菌病绵羊流产胎儿一只，如何进行细菌学检查?
2.布氏杆菌病主要血清学诊断方法有几种?其优缺点如何?
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新城疫的实验室诊断
（一）实验目的
1．掌握鸡新城疫的临诊诊断要点。
2.系统地了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。 （二）实验原理
（三）实验准备
抗凝剂的制备： ，分装、纱布扎口、灭菌消毒15磅/20min。 1％红细胞悬液制备： 用具：96孔 型微量反应板、微量移液器(配有滴头)、0.9%的生理盐水。 （四）实验步骤 鸡新城疫病毒的鉴定
血凝（HA）试验
单位：ml
孔号 稀释度 生理盐水 鸡胚液 红血球（1%） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 振荡混匀37℃作用15min观察结果 结果举例 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ + ― ― ― 12
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++++ 为 ；+++和++为 ；一为 。
凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，称为该病毒的血凝滴度，如表所示，病毒滴度为1：26。用于下述血凝抑制试验的病毒制备 ，即 ，例如，一个血凝单位为1：64，4个血凝单位则为 。
HA试验完成后，确定4单位抗原，进行 试验。
血凝抑制（HI试验）
单位：ūl
孔号 稀释度 生理盐水 备检血清 鸡胚液 1 2 3 4 红血球 结果举例 ― ― ― ― ++ +++ +++ +++ ++++ ++++ ― ― 5 6 7 8 9 10 11 12 ++++ 为 ；+++和++为 ；一为 。
（五）结果分析
HA实验结果
孔号 结果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 配制四单位抗原为 。 HI实验结果 孔号 结果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 HI价为 ，免疫保护水平的 。 （六）注意事项
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1、NDV中含有HN→神经氨球酶→解凝作用可与红血球发生凝集作用，但时间过长，又发生解凝作用，在时间把握上很重要，解凝后，红CELL受体被破坏，就不能再凝了。 2、一个血凝价（HA）含有一个单位病毒，需4个单位病毒，也就是向前推两孔，国际标准需用4单位病毒。 （七）思考题
1.免疫鸡群发生新城疫流行时有何特点?
2．简述确诊新城疫的实验室诊断程序。
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