大孔树脂法纯化苦丁茶总黄酮的研究

【摘要】  目的确定大孔树脂分离苦丁茶总黄酮的最佳工艺条件。方法以吸附率及解吸率为考察指标，确定最佳型号树脂，静态和动态吸附及解吸的相关影响因素。结果HP-20型大孔树脂对苦丁茶总黄酮有良好的吸附，其吸附分离的工艺条件的药液浓度为1.2 mg/ml，以3 m1/min吸附速率进行吸附，2.5倍柱体积的70%乙醇洗脱效果最佳。结论该方法简单易行，分离效果好，适于苦丁茶总黄酮的分离纯化。

【关键词】  大孔树脂; 纯化; 苦丁茶; 总黄酮

　　Abstract：ObjectiveTo establish the optimum process conditions for purification of flavonoids from Kudincha by macroporous resin. MethodsSeven types of macroporous resin were used to purify flavoniods of Kudincha, and the optimum macroporous resin，relative factors of absorption and desorption for static state and dynamic state were determined with absorption and desorption rate as observation indexes. ResultsThe HP-20 macroporous resin had good absorbing effect on flavonoids of kudincha.The liquid concentration of absorbing and separating technological environment was 1.2mg/ml and the absorbing speed was 3m1/min.The elution effect of 70% alcohol with 2.5 times volume was the best. ConclusionThis method is simple and feasible and fit for separation and punifiation of flavonoids from Kudincha.

　　Key words：Macroporous resins; Purification; Kudincha; Flavonoids

　　苦丁茶中含有大量的黄酮、蒽酮类化合物、生物活性多糖、香豆素类内酯、芳香成分。它具有消炎、扩张冠状动脉、增加冠脉流量、改善微循环、抑菌、抗肝炎病毒、抗肿瘤等功效[1，2]。大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是依靠它和被吸附分子之间的范德华力，通过它巨大的比表面积进行吸附而工作的[3，4]。它具有物理化学稳定性高、吸附选择性好、富集效果好、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和、使用周期长、节省费用等优点，被广泛应用于天然产物的分离纯化[5]。本文用7种不同类型的大孔树脂分离纯化苦丁茶总黄酮，为苦丁茶的开发利用提供科学的工艺参数。

　　1 材料与试剂

　　苦丁茶，市售，粉碎过40目筛，80℃烘干备用。乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、NaOH等，均为分析纯;大孔树脂AB-8，NKA-9，D-100，HP-20，HPD-400，HPD-500，HPD-600(南开大学化工厂)。芦丁对照品，购于中国上海医药化学试剂公司。

　　2 方法

　　2.1 树脂的预处理乙醇浸泡24 h→用乙醇洗至流出液与水(1∶5)不浑浊→用水洗至无醇味→5%HCl通过树脂柱，浸泡2～4 h→水洗至中性→2%NaOH通过树脂柱，浸泡2～4 h→水洗至中性，备用[4，5]。

　　2.2 芦丁标准曲线的绘制[6]回归方程为：A=9.153 6 C-0.004 7(R2=0.999 7)

　　2.3 苦丁茶总黄酮提取物的制备称取苦丁茶粉末40 g，加10倍量70%乙醇回流提取3次，1 h/次，过滤，合并滤液，利用旋转蒸发仪浓缩，然后加蒸馏水充分搅拌溶解过滤，即得样品溶液，备用。

　　2.4 黄酮含量的测定吸取一定量的样液于25 ml的容量瓶中，按“2.2”项方法操作，测定并计算总黄酮的含量。

　　2.5 大孔树脂的筛选

　　2.5.1 静态吸附取7种处理好的大孔树脂各10 g，分别加入苦丁茶水溶液30 ml，开始每5 min振摇1次，2 h后静置，6 h后分别取各树脂吸附后的溶液于510 nm处测定吸光度，计算各种树脂对苦丁茶总黄酮的吸附量和吸附率[3]。

　　2.5.2 静态解吸静态吸附后的树脂过滤抽干，加30 ml 70%乙醇解吸，置于摇床上，4 h后分别取各解吸液0.2 ml，于510 nm处测定吸光度，计算各种树脂对苦丁茶总黄酮的解吸率[3]。

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