高效液相色谱法测定大风丸中蛇床子素的含量

【摘要】  目的 建立大风丸中蛇床子素含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,Diamonsil ODS1 C18柱,流动相为甲醇-0.1 mol/L硫酸铵溶液(70∶30),用硫酸溶液(1→5)调pH为2.5,流速为1.0 mL/min,检测波长322 nm。结果 蛇床子素在0.101～0.808 μg范围内呈良好线性,回归方程为Y＝9.964 406×10-3X－1.355 684×10-1,r＝0.999 5,平均加样回收率为98.4%,RSD＝1.40%(n＝6)。结论 本方法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,是大风丸中蛇床子素定量分析的有效方法。

【关键词】  大风丸；蛇床子素；高效液相色谱法；含量测定

    Abstract：Objective To establish the method for determining the content of Fructus Cnidii in Dafeng wan by HPLC. Methods Diamonsil ODS1 C18 column was used with CH3OH-0.1 mol/L (NH4)2SO4 (70︰30) [adjust pH to 2.5 by sulphuric acid solution (1→5)] as the mobile phase. The detection wavelength was set at 322 nm and flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear at the range of 0.101～0.808 μg for the Fructus Cnidii and linear equation was Y＝9.964 406×10-3X－1.355 684×10-1, r＝0.999 5. The average recovery was 98.4% and RSD was 1.40% (n＝6). Conclusion This method was simple and accurate, with good specificity and repeatability, which provides scientific quantitative analysis method of Fructus Cnidii in Dafeng wan.

    Key words：Dafeng wan；Fructus Cnidii；HPLC；content determination
 
    大风丸收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第六册,原标准中只有鉴别项检查,没有含量控制项。本处方中的君药独活为伞形科植物重齿当归Angelica pubescens Maxim. f.biserrata Shan et Yuan的干燥根,蛇床子素为独活的主要成分之一。为更好控制产品质量,我们参照有关文献[1],对大风丸中蛇床子素的含量测定进行了试验研究。

　　1  仪器与试药

    高效液相色谱仪(SPD-10A,日本岛津)；紫外分光光度仪(上海康化生化仪器制造厂)；超声波清洗器(SK3200H,上海科导超声仪器有限公司)。蛇床子素对照品(批号11082-200305,供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；大风丸(批号20070401、20070402、20070403)由河南百年康鑫药业有限公司提供。其他试剂均为分析纯

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统适用性试验

    以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-0.1 mol/L硫酸铵溶液(70∶30),用硫酸溶液(1→5)调pH为2.5；检测波长为322 nm；流速为1 mL/min；柱温为室温。理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于1 500。

　　2.2  溶液的制备

    对照品溶液的制备：精密称取蛇床子素对照品适量,加甲醇制成每1 mL中含蛇床子素40 μg,摇匀,即得。

    供试品溶液的制备：取本品研细,取约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入10 mL甲醇,称定重量,超声(功率135 W,频率59 kHz)20 min,放冷后再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

　　2.3  线性关系考察

    精密称取蛇床子素对照品适量,用甲醇溶解,制成每1 mL含1.01 mg蛇床子素的溶液。分别精密吸取适量,稀释成10.1、20.2、40.4、60.6、80.8 μg/mL 5个不同浓度样品,分别吸取上述溶液各10 μL进样,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,蛇床子素的浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程：Y＝9.964 406×10-3X－1.355 684×10-1,r＝0.999 5(n＝5),表明蛇床子素在0.101～0.808 μg之间呈良好的线性关系。

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