葡萄胎组织MMPs与TIMPs表达及意义

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【关键词】  基质金属蛋白酶类 基质金属蛋白酶组织物抑制物 葡萄胎
 [ABSTRACT]ObjectiveTo explore the expressions of MMPs and TIMPs in hydatidiform mole and their clinical significance.MethodsThe mRNA expressions of MMPs and TIMPs were detected by RTPCR in tissue of hydatidiform mole (n=35) including six malignant transformed mole and normal villi (n=18).ResultsThe ratios of MMP9/TIMP1 mRNA expressions were significantly higher in the malignant transformed mole than those in the nonmalignant one and normal villi(F=3.62,q=3.82,3.57,P<0.05). The differences in expressions of MMPs and TIMPs were not significant in all cases (P>0.05). Positive correlation between MMP7 and MMP9 expression was noted (r=0.985,P<0.01).ConclusionIt is certain that the ratios of MMP9/TIMP1 mRNA expression plays a role in predicting malignancy of hydatidiform mole.
    [KEY WORDS]matrix metalloproteinases; tissue inhibitor of matrixnetalloproteinases; hydatidiform mole
    葡萄胎属于良性肿瘤,但是它具有潜在恶变的性能,虽然长期备受学者们的关注,但目前为止仍无理想的预测恶变的方法。虽然血绒毛膜促性腺激素(HCG)可作为一种较敏感的标志物用于预测葡萄胎的恶变,但是它有一定的滞后性。而基质金属蛋白酶(MMPs)几乎可降解细胞外基质(ECM)中除多糖以外的所有成分,是调节ECM动态平衡的最重要的一大酶系。基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs) 能与相应的MMPs 酶原及其活化形式结合,从而抑制MMPs的活性及产生,阻止肿瘤发生恶变和转移,因此,TIMPs的调节失衡在肿瘤的侵袭及转移中可能起重要作用。本研究通过检测基质金属蛋白酶及其抑制物MMP7、MMP9、TIMP1及TIMP2 mRNA在正常绒毛和葡萄胎组织中的表达水平,探讨它们与葡萄胎恶变间的关系,为临床治疗提供依据。
    1  资料与方法
    1.1  一般资料
    35例葡萄胎病例均为2001年1月~2003年1月在青岛大学医学院附属医院住院病人,经病理检查诊断为葡萄胎,清宫前均未进行预防性化疗;病人年龄22~36岁,中位年龄28岁;平均孕周为12周;随访期间有6例恶变为侵蚀性葡萄胎,其诊断参照宋鸿钊[1]提出的侵蚀性葡萄胎的诊断标准,列为葡萄胎恶变组(A组),其余病人作为萄胎未恶变葡组(B组)。18例行人工流产健康妇女作为对照组,随访后未发生滋养细胞疾病或持续性血HCG升高;病人年龄23~36岁, 中位年龄28岁;平均孕周为12周。
    1.2  方法
    1.2.1  新鲜标本的收集与处理  所有标本均在清宫时收集,取宫腔小水泡组织约0.5 g,置于 1.5 mL DEPC处理EP管中,立即置-79 ℃冰箱中备用。 
    1.2.2  RTPCR方法  所有引物均由上海生工生物有限公司合成,以GAPDH为内参照。组织样本匀浆破碎后,按照Trizol(Invitrogen公司)说明提取总RNA,用紫外分光光度计测定RNA样品于波长260和280 nm处的吸光度,以观察所提取RNA样品的纯度,并计算其含量;取1 g总RNA按照PromegaA3500逆转录试剂盒说明合成cDNA;取3 μL 逆转录产物,2.5 μL buffer,1.5 μL MgCl2,0.5 μL dNTP,上下游引物各1.25 μL,Taq酶0.2 μL,最后加入去离子水至25 μL。开始94 ℃变性5 min,然后94 ℃预变性30 s;MMP9、MMP7、TIMP1及TIMP2分别行54、57、53、57 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共30个循环;最后72 ℃延伸10 min,4 ℃保存;取5 μL PCR产物,1 μL上样缓冲液于20 g/L的琼脂糖凝胶中电泳60 min,在紫外线下凝胶成像。

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