山茱萸总苷的提取工艺及药理研究

孙志明　门秀丽

（河北联合大学基础医学院，河北 唐山 063000）

【摘要】山茱萸总苷是中药山茱萸的主要有效部位，药效明显，具有新药开发的意义。本文就山茱萸总苷在提取工艺、含量测定、药动学、药效学等方面进行综述。

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关键词 山茱萸总苷；提取；药动学；药效学

作者简介：孙志明（1971—），男，河北联合大学在读硕士研究生，研究方向为中药药效物质基础。

通讯作者：门秀丽，教授、硕士研究生导师，研究方向为2型糖尿病发生机制与防治。

中药山茱萸为我国传统名贵中药，有补肝肾，涩精气，固虚脱之功效[1]，具有降血糖、免疫调节、抗衰老、抗休克、抗心律失常、抗菌、抗炎、抗癌、抗艾滋病、不育症和治疗骨质疏松症等药理活性，其主要成分为环烯醚萜苷类、五环三萜酸及其酯类、鞣质类、挥发油类及多糖类等[2-4]。作为主要药效部位的山茱萸总环烯醚萜苷包括马钱苷（loganin）、莫诺苷（morroniside）、獐牙菜苷（sweroside）、獐芽菜苦苷（swertiamarin）、马鞭草苷（verbenalin）、脱水莫诺苷元、山茱萸新苷（cornuside）等十余种，统称为山茱萸总苷(Total glucosides from Cornus officinalis，TGC)。本文对山茱萸总苷的提取工艺、含量测定、药动学、药效学的研究进展进行综述。

1提取工艺

中药苷类的提取一般采用含乙醇的水溶液提取，纯化则采用大孔吸附树脂富集的方法。

梁晋如等[5]采用星点设计-响应面法优化山茱萸总苷的提取及纯化工艺。以乙醇浓度、液料比和提取时间为自变量，以莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的收率以及提取物得率为因变量，通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合，以响应面优选最佳的超声提取工艺。以乙醇浓度、洗脱体积、上样量为自变量，以莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的收率以及洗脱物得率为因变量，通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合，以响应面优选最佳的大孔树脂纯化工艺。确定提取工艺条件为乙醇浓度22%～25%，液料比12～15倍，提取时间30～40 min；纯化工艺条件为乙醇浓度35%～45%，洗脱体积7～9 BV，上样量40～50 mg/g。

不同型号的大孔树脂对药物的吸附程度不同。赵惠茹等[6]通过比较山茱萸总皂苷在9种不同型号大孔树脂上的吸附与解吸性能筛选最佳树脂，确定HPD-300型大孔树脂具有良好的吸附与解吸性能，工艺参数为：上样溶液质量浓度为0.5 g/mL，树脂柱径高比为1:7，吸附体积流量为2BV/h，每克干树脂的最大吸附量为1.125g生药。吸附饱和后，先用3 BV蒸馏水洗脱去除水溶性杂质，再用3.5 BV 50%乙醇进行解吸附，纯化后的山茱萸总皂苷保留率和精制度分别为92.6%和394.5%。HPD-300型大孔树脂可作为纯化山茱萸总皂苷的较佳分离材料。

姬长新等[7]将山茱萸首先采用超高压进行处理，然后将高压处理后的山茱萸采用纤维素酶进行酶解提取，研究超高压耦合纤维素酶处理对山茱萸得率的影响。结果表明，采用400MPa压力处理3min，然后加入纤维素酶达到浓度1mg/mL，温度55℃，pH4.5下酶解120min，山茱萸总皂甙的得率达到3.68%，是一种提取山茱萸总皂甙的新方法。

Liang J等采用高速逆流色谱法，选择二氯甲烷-甲醇-正丁醇-水-乙酸（5:5:3:4:0.1，v/v/v/v/v）组成的两相溶剂系统，不到3h就从100mg山茱萸提取物中分离纯化得到7.9mg獐牙菜苷，13.1mg莫诺苷和10.2mg马钱苷共三种环烯醚萜苷，纯度分别为92.3，96.3和94.2%。

2含量测定

中国药典（2010版）规定以测定马钱苷的含量来控制山茱萸药材的质量，以乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长为240nm[1]。

李伟等建立反相高效液相色谱法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量的方法，方法为Lichrosphere C18柱(4.6mm×150mm,5μm)，流动相为乙腈-水梯度洗脱(0~12min，乙腈10%~55%)，检测波长240nm。结果马钱苷和莫诺苷分别在0.088~0.528μg（r=0.9998）和0.088~0.352μg（r=0.9995）之间线性良好，可以用于控制山茱萸环烯醚萜总苷的质量。

Cai H等建立HPLC串联电喷雾电离质谱法同时测定山茱萸中莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、7-O-甲基莫诺苷、山茱萸新苷和没食子酸等八种成分的含量，采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式，Agilent Zorbax Extend C18色谱柱，可在10min全部检测完成，定量限0.0042~12.7875ng/mL，平均回收率 97.1~103.7%。

3药动学

中药药动学对阐明中药的有效性、有效成分的作用机制、解释中药复方配伍的合理性及中医的辨证施治等都有重要意义，同时还为新活性成分的发现、新药合成及新的前体药物的制备提供理论和实践的依据。

山茱萸总苷中马钱苷和莫诺苷的吸收、分布、代谢和排泄均有报道。如山茱萸注射液中马钱苷和莫诺苷在小鼠体内药物代谢动力学研究，马钱苷和莫诺苷均符合二室模型，主要药动学参数t1/2(α)，t1/2(β)，k21，k12，k10，V，AUC，CL分别为3.2，25.1min，6.0，4.98，3.56/h，0.551L/kg，13.6mg·h/L，1.96 L/kg·h；3.6，21.5min，5.93，3.83，3.80/h，0.647L/kg，27.2mg·h/L，2.46L/kg·h。组织分布方面，马钱苷在肾中药物浓度最高，其次在胃、肺、小肠等组织，脑组织中最少。大多数组织的药物含量于给药后90 min 最高，然后逐渐下降。莫诺苷在小肠中药物浓度最高，其次在肾和胃等组织，心、肝、肺和脾中浓度较低，脑组织中未检测到莫诺苷。马钱苷在大鼠体内的尿液排泄药动学表明，24 h内马钱苷原型药物经尿排泄完全，排泄量主要集中在0~4 h，约占总排泄量的81.5%；莫诺苷在24h内原型药物经尿排泄完全，排泄量主要集中在0~3 h，约占总排泄量的68.5%。马钱苷可被肠道细菌酶水解生成苷元，苷元又进一步代谢转化，生成代谢物Mlog-2，Mlog-2最终被排出体外。莫诺苷可被肠道细菌酶水解形成苷元，经环裂解，与NH3发生亲核加成后环化及脱水缩合等步骤生成代谢物Mmor-1，苷元经环裂解，安息香缩合，与NH3发生亲核加成后环化生成代谢物Mmor-2，Mmor-1和Mmor-2最终排出体外。

药动学参数的处理方法除了传统的3P97、DAS等以外，还可以采用BP神经网络预测莫诺苷的药动学参数。

4药效学

山茱萸总苷对糖尿病的作用。以高脂饲养结合STZ腹腔注射造模，于造模后2周分别灌胃给予降糖通脉胶囊、山茱萸总苷（0.05、0.1、0.2 g/kg）治疗，连续16周。结果显示应用山茱萸总苷后，糖尿病大鼠血糖降低，血清NO、NOS水平升高，血浆ET水平降低，心指数降低，心肌肥大程度减轻，对糖尿病心脏病变有一定的保护作用。郭洁等采用巨噬细胞和肾系膜细胞共培养体系，确定山茱萸环烯醚萜总苷显著抑制晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的巨噬细胞迁移能力，不同剂量山茱萸环烯醚萜总苷(1.0、0.5、0.25 mg/mL)对巨噬细胞迁移抑制率分别为42.09%±7.25%、26.44%±10.23%、20.84%±6.84%；显著抑制AGEs诱导的炎症因子IL-6、IL-10、MCP-1和TNF-α的分泌水平；Western blot分析显示山茱萸环烯醚萜总苷及AGEs受体特异性抗体显著下调AGEs诱导的ICAM-1和TGF-β1的蛋白表达。山茱萸环烯醚萜总苷可剂量依赖性地减轻AGEs诱导的大鼠肾系膜细胞HBZY-1炎症反应，对糖尿病肾病的发生发展具有一定的保护作用。Ma W等研究表明山茱萸中的苷类抑制体外高糖培养HRMCs的IV型胶原抗体、纤维连接蛋白和IL-6。目前已经证实山茱萸总苷中的莫诺苷是降糖作用的主要有效成分。

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