云南松中莽草酸含量的高效液相色谱法测定

           作者：夏从龙，周浓，刘光明，张海珠，张烨 

【摘要】  目的建立云南松中莽草酸的高效液相色谱测定方法，以分别考察云南松的不同部位中莽草酸的含量。方法色谱柱为Agilent Zorbax XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-1 %磷酸水溶液(3∶97)，流速为0.8 ml·min-1，检测波长为214 nm，柱温为25 ℃。结果莽草酸线性范围为0.083～1.66 μg，相关系数r=0.999 9，平均回收率为99.12%，RSD为1.16%(n=6)。云南松不同部位均含有莽草酸成分，且含量差异较大。结论云南松中的莽草酸可以作为新的莽草酸资源加以开发利用。

【关键词】  云南松; 莽草酸; 高效液相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo investigate the content of shikimic acid in different parts of Pinus yunnanensis by establishing the high performance liquid chromatographic method.MethodsAgilent Zorbax XDB-C18 column(4.6 mm×150 mm, 5 μm) was adopted, the mobile phase was methanol-1% phosphoric acid solution (3:97), the flow rate was 0.8 ml·min-1, the detection wavelength was 214 nm, column temperature was 25℃.ResultsThe result indicated good linearity over the range of 0.083～1.66 μg with coefficients(r) of 0.999 9, the average recovery was 99.12 %,RSD was 1.16 % ( n=6). The all different parts of P. yunnanensis contained shikimic acid element, and the content showed obvious difference.ConclusionThe shikimic acid in P. yunnanensis can be used as the new shikimic acid resources for exploitation and utilization.

　　Key words：Pinus yunnanensis; Shikimic acid; HPLC

　　云南松Pinus yunnanensis Franch.为松科松属植物，为我西南森林资源的重要树种[1]。松的药用历史始载于《名医别录》《本草纲目》中较为详细地描述了松针、松塔等的产地、形态、功效与主治[2] ，主要含萜类、黄酮类等成分。现代药理学研究证明莽草酸具有较强的抗炎、镇痛、抑制血小板聚集和抗HIV作用[3，4]，也是目前唯一在临床上治疗感染禽流感病毒的人的有效药物“达菲”的基本原料[5]。莽草酸的化学合成，目前由于反应条件苛刻、成本高而难以满足市场需求，筛选廉价的莽草酸提取原料显得十分迫切 [6]。我国云南松资源丰富。为了寻找该植物中的活性成分，综合利用其资源，本研究首次采用HPLC法测定云南松的松针、松塔、松枝、树皮中莽草酸含量，为有针对性地开发利用我国各地丰富的云南松资源中莽草酸提供科学依据。

　　1 仪器与试药

　　Agilent 1100 高效液相色谱仪;KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);AE240电子天秤〔(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)〕。

　　莽草酸对照品(HPLC峰面积归一化法测定纯度达99%以上，成都曼斯特生物科技有限公司)。甲醇、乙腈为色谱醇(美国Tedia试剂公司)，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为国产分析纯。

　　云南松样品2009-08-19采集于云南省大理、漾鼻两地，经笔者鉴定为云南松Pinus yunnanensis Franch.。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件及系统适用性色谱柱为Agilent Zorbax XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-1 %磷酸水溶液(3∶97)，流速为0.8 ml·min-1，检测波长为214 nm，柱温为25 ℃。理论塔板数按莽草酸峰计算不低于5 000，与其他峰的分离度均大于1.5。对照品溶液和供试品溶液分别进样10 μl，记录色谱图，莽草酸的保留时间约为2.8 min。见图1。

　　1.莽草酸(shikimic acid)

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