9-湖南省2024年肾综合征出血热监测实施方案

湖南省2010年肾综合征出血热监测实施方案

一、前言

肾综合征出血热（以下简称出血热）是由汉坦病毒引起的一种自然疫源性疾病，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病。鼠类为其自然宿主和主要传染源。根据主要传染源种类的不同，我国出血热可分为姬鼠型和家鼠型两种主要类型，其中黑线姬鼠为姬鼠型出血热的主要宿主动物和传染源；褐家鼠为家鼠型出血热的主要宿主动物和传染源。通过多年研究，已经基本明确了我国存在姬鼠型、家鼠型和家鼠姬鼠混合型3种疫区，此外，近年来在我国还发现了以棕背鼠平为主要宿主动物的普马拉型汉坦病毒出血热。

本病在我省分布广，多数疫区以姬鼠型为主的混合型。2009年湖南省报告HFRS病例483例，发病率0.7565/10万，报告死亡病例8例，死亡率0.0125/10万，病死率1.66%。2009年发病率较2008年下降1.75%。出血热病例以农村青壮年人群为主，不仅对人民身体健康和生命安全造成危害，而且对社会经济发展造成严重影响，已经成为一个重要的公共卫生问题。因此，在全省系统地开展出血热的流行病学和病原学监测，了解我省出血热的疫情动态和流行规律，了解宿主动物情况和病原分布，分析其流行因素，特制定2010年肾综合征出血热的监测实施方案。

二、监测目的

1、了解我省出血热的疫情动态和流行规律。

2、了解我省出血热的主要宿主动物密度、构成和感染情况。 3、了解我省出血热流行毒株的型别、分布及变异等情况。 4、为分析出血热流行趋势和制定相应的防治对策提供科学依据。 三、监测病例定义 （一）诊断原则

根据患者的流行病学史、临床表现及实验室检查结果进行综合判断。 （二）诊断标准 1、流行病学史

1.1发病前2个月内有疫区旅居史。

1

1.2 发病前2个月内有与鼠类或其排泄物（尿、粪）、分泌物等有直接或间接接触史或可疑接触史。

2、临床表现

2.1发热，可伴有乏力、恶心、呕吐、腹痛及腹泻等消化道症状； 2.2 充血、渗出和出血等毛细血管损害表现：如面潮红、颈潮红和胸潮红（三红），酒醉貌，头痛、腰和眼眶痛（三痛），球结膜充血、水肿，皮肤出血点，重点可有腔道出血。

2.3 低血压休克。

2.4 肾脏损害:尿蛋白、镜下或肉眼血尿，尿中膜状物，少尿或多尿。 2.5 典型病程分为发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期和恢复期（五期经过）。

3、实验室检查

3.1 血常规:发热期外周血白细胞计数增高和血小板减少，出现异型淋巴细胞；血液浓缩（低血压休克期）或血液稀释（少尿期）。

3.2 尿常规:尿蛋白阳性，可出现镜下血尿、管型尿。可有肉眼血尿和尿中膜状物；尿沉渣中可发现巨大的融合细胞。

3.3 血生化检查:血肌酐、尿素氮升高。 3.4 血清特异性IgM抗体阳性。

3.5 恢复期血清特异性IgG抗体比急性期有4倍以上增高。 3.6 从患者标本中检出汉坦病毒RNA。 3.7从患者标本中分离到汉坦病毒。 4、病例分类

4.1 疑似病例：1.1和(或)1.2,同时具备2.1和(或)2.2者,且不支持其他发热性疾病诊断者。

4.2 临床诊断病例：疑似病例，同时具备加2.3、2.4、2.5、3.1、3.2、3.3中至少一项者。

4.3 确诊病例：临床诊断病例或疑似病例，同时具备3.4、3.5、3.6、3.7中至少一项者。

四、监测内容 （一）常规监测

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1、监测参与单位

全省各级疾病预防控制中心。 2、病例的发现和报告

按照《中华人民共和国传染病防治法》和《突发公共卫生事件与传染病疫情监测信息报告管理办法》进行疫情报告。

3、个案调查

县疾病预防控制中心对辖区内所报告的出血热临床诊断病例和实验室确诊病例及时进行个案调查（个案调查表见附表1）。

县疾病预防控制中心于每月10日前将上一月个案调查表录入数据库，并逐级上报至省疾病预防控制中心。年底省CDC将收集全省个案数据库上报至国家CDC。

4、血清学核实诊断

县级疾病预防控制中心在对病例进行个案调查后采集急性期血清，由县级疾病预防控制中心或者上送市（州）级疾病预防控制中心应用Mac ELISA或胶体金标记试纸条方法进行血清学核实诊断（见附件1、2）检测，市（州）级疾病预防控制中心确实无条件开展者，可与省疾病预防控制中心微检科联系，经许可后上送检测。血清学核实诊断结果及时录入个案调查表数据库。

5. 暴发疫情调查与监测 （1）暴发疫情的报告

按照《中华人民共和国传染病防治法》和《突发公共卫生事件与传染病疫情监测信息报告管理办法》进行疫情报告。

（2）暴发疫情的调查

暴发疫情的调查由县级卫生行政部门组织，县级疾病预防控制机构具体实施。县级疾病预防控制机构接到疫情报告后，应在24小时内到达现场开展调查。

1）核实诊断

①病例核实：对报告的病例逐个进行详细的个案调查，并进行血清学或病原学检测。

②疫情核实：了解暴发点近期有无类似病例发生，并对发现的可疑病例进行个案调查，了解三间分布情况。对所有病人进行血清学或病原学检测。

2）基本情况调查

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①详细调查暴发点的人口资料、患者及居民居住环境、自然地理景观、气象资料等流行因素。

②了解暴发点所在地的既往疫情情况和流行强度。

③了解暴发点所在地出血热宿主动物的种类、分布、密度及感染情况。 3）宿主动物调查

在暴发点的居民区（患者居住地及周围）和野外进行宿主动物种类、密度调查，捕获数量各不少于50只，对捕获的宿主动物进行感染状况调查。

4）人群感染状况调查

采集暴发点内高危人群血标本50～100份，用免疫荧光法或ELISA法进行抗体水平的检测（见附件3、4），了解人群感染状况。

（3）控制措施

在疫情调查后，立即对暴发点采取灭鼠防鼠、预防接种等综合性防制措施。 1）灭鼠：按照卫生部出血热防治工作的有关要求进行灭鼠。灭鼠3周后的鼠密度室内应达到1%以下、室外3%以下。

2）应急预防接种：对暴发点内的高危人群实施应急预防接种，接种率应达80％以上，防止疫情蔓延。

3）灭螨：对床铺草垫、地面、室外草丛、柴草堆等处采用药物灭螨。 4）环境治理：大力开展爱国卫生运动，整治和改善环境卫生。

5）健康教育：利用各种媒体及途径，在暴发点内，开展出血热防病知识的宣传，增强群众防病和参与防治的意识。

（4）总结

暴发疫情处理后，及时收集、整理、统计、分析调查资料，在疫情处理结束后7日内，写出详细的暴发调查报告，逐级上报至省、国家疾病预防控制中心。同时，将个案调查表录入数据库，一并上报。

（二）监测点监测 1、监测点

宁乡县为国家监测点，双峰县、邵东县、炎陵县为省级监测点。 2、监测内容

在常规监测的基础上增加以下监测内容 （1）一般资料的收集

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各监测点所在的县级疾病预防控制中心将近两年自然地理资料（包括地形、地貌、河流、植被、海拔、气温、降雨量、土壤等）和社会经济资料（人口数、人口构成和居民人均收入）等上报省疾病预防控制中心。

（2）病例血清学核实诊断

对监测点报告的出血热临床诊断病例，县级疾病预防控制中心在对病例进行个案调查后采集急性期血清，由县级疾病预防控制中心或者上送市（州）级疾病预防控制中心应用Mac ELISA或胶体金标记试纸条方法进行血清学核实诊断（见附件1、2）检测，监测点的血清一律不送省CDC检测，并将血清学核实诊断结果及时录入个案调查表数据库。

（3）病例的病原学监测

采集急性期患者的全血进行PCR、病毒分离、核苷酸序列测定和交叉中和实验，分析流行型别（见附件5、6）。

1）核酸检测

MacELISA法或胶体金标记试纸条方法核实诊断阳性的病例，由省疾病预防控制中心采用RT-PCR进行核酸检测。

2）病毒分离

各监测点每年采集一定数量的急性期病例全血送省疾病预防控制中心进行病毒分离。省每年从血清中分离汉坦病毒2株，混合型疫区分离姬鼠型和家鼠型各1株。阳性病毒分离物送中国疾病预防控制中心进一步鉴定。

3）序列测定

省疾病预防控制中心对分离到的病毒和阳性PCR产物进行M和S片段序列测定（省疾病预防控制中心适时将标本送中国疾病预防控制中心进行序列复核测定）。

4）血清分型

各监测点每年采集20份实验室确诊病例（实验室确诊病例数少于20例者全采）恢复期血清送省疾病预防控制中心，进行交叉中和实验（附件7），进行血清学分型。

（5）宿主动物监测

以县（区）为单位，逐步查清居民区及野外宿主动物种类、分布、密度、感染率和所带病毒的型别及变异情况（见附表2、3、4）。

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未设监测点的地区可参照以下内容进行宿主动物监测。 1）鼠密度的监测

①调查点的选择

根据监测点的疫情分布情况和地理景观选择调查地点。农村居民区应选择有代表性的、既往有出血热病人发生的自然村；在调查自然村外500米半径范围内，进行野外鼠密度调查，应选在河流、水渠、道路两旁、田埂、坟地和场院等可能有鼠类栖息活动的地方。

②监测时间

每年3～4月和9～10月各一次，分别在农村居民区和野外同时进行监测。

③捕鼠方法

野外应选择有鼠活动的地方，行距30m以上，夹距5m布夹（中号夹）200夹次；居民区布夹每15㎡房间放夹一个，一次布夹100夹次，连续布夹多天（直至野外、居民区分别捕鼠100只、50只）。室内外统一用生花生作诱饵，晚布晨收，所获鼠用塑料袋装。

④分类鉴定

记录捕获的宿主动物名称应写学名，其名称和鉴定方法、标准参考《医学动物分类鉴定》、《肾综合征出血热监测及疫苗应用研究》附录部分（陈化新，罗成旺主编，2001年香港医药出版社）。

2）鼠感染率调查

各监测点，每次分别在居民区捕鼠50只以上、野外捕鼠100只以上，进行血清学和病原学检测，计算感染率。

①鼠标本的采集

取分类鉴定的鼠，无菌解剖，同时采集鼠肺和鼠心，同时将其分成两份，一份带心脏，另一份不带心脏，放入编号的冷冻螺口塑料管内，封口，将上述标本带到实验室后，应及时放入液氮罐内保存，若无液氮罐，也可放到超低温（-70℃冰箱），若克超低温（-70℃冰箱）则放在低温冰箱（-20℃冰箱）内短期保存（不超过两周），然后立即上送省CDC实验室保存。

②鼠肺抗原和血清抗体检测

省疾病预防控制中心应用免疫荧光法检测鼠肺出血热病毒抗原，或用双抗原夹心ELISA检测鼠出血热抗体（见附件8、9）。

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3）宿主动物的病原学监测

① 核酸检测

省疾病预防控制中心对免疫荧光阳性鼠肺标本，采用RT-PCR方法（见附件6）进行核酸检测。

②病毒分离

各监测点对采集的阳性鼠肺标本，送省疾病预防控制中心进行病毒分离（见附件5）。省每年从鼠肺中分离汉坦病毒2株，混合型疫区分离姬鼠型和家鼠型各1株，阳性病毒分离物送中国疾病预防控制中心进一步鉴定。

③序列测定

省疾病预防控制中心对分离到的病毒和阳性PCR产物进行M和S片段序列测定（省中心也可将标本送中国疾病预防控制中心进行序列测定）。

（6）结果的报告与反馈

省疾病预防控制中心每年7月15日和次年1月15日将病例、宿主动物病原学监测结果（包括核酸检测、病毒分离、序列测定）及鼠密度和鼠感染情况监测结果（附表2、3）报中国疾病预防控制中心（见附表4），并向监测点反馈。

五、工作职责

（一）省疾病预防控制中心

1、根据国家监测方案，结合本省实际情况制定本省监测实施方案；协组国家疾病预防控制中心确定本省国家级监测点，建立和完善本省的监测网络；

2、负责本省监测专业技术人员培训工作；

3、承担本省国家级及省级监测点的管理、业务指导，参与国家CDC对国家级监测点的监测工作检查、考核。

4、与本省国家级及省级监测点疾病预防控制机构签订协议，明确具体任务和目标，按其完成情况确定监测经费补助数额。

5、完成国家监测方案中要求的病例抽查、血清学和病原学等监测任务。 6、对全省监测资料进行收集、汇总和分析，按要求上报中国疾病预防控制中心，并进行反馈。

7、对监测点的监测工作进行质量控制。 （二）市级疾病预防控制中心

根据方案要求，协助省中心完成本地区监测点的监测任务和管理、业务指导；

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参与本地区监测点的监测工作。

（三）县级疾病预防控制中心

1、按方案要求，及时、准确的对临床诊断病例进行个案调查，数据录入，按规定的时限上报省（市）疾病预防控制中心。负责病例标本的采集、检测、上送。

2、承担宿主动物种群、密度的监测工作和宿主动物标本的采集，并及时将采集的标本送省疾病预防控制中心进行检测。宿主动物监测完成后，在15内上报省疾病预防控制中心。

3、 负责暴发疫情的调查处理。 （四）监测点所在地医疗机构

在当地卫生行政部门的统一领导下，配合疾病预防控制部门的各项监测工作，负责完成门（就）诊和住院病例的标本采集，协助疾病预防控制机构开展病例个案调查。

六、数据收集、分析、反馈 （一）数据收集内容 1、疫情报告卡

2、个案调查表（见附表1） 3、暴发疫情调查处理报告

4、宿主动物调查统计报表、宿主动物感染情况报表（见附表2、3） 5、实验室检测记录 （二）统计分析指标

1、发病情况及趋势：发病数（例）、死亡数（例）、发病率（/10万）、病死率（％）和死亡率（/10万）。

2、病例分布情况：病人年龄、性别、职业、时间、地理分布等。 3、宿主动物种类、分布、密度、带毒情况。 4、病毒分离及基因变异情况。

5、疫源地分型：通过RT-PCR分型、对病毒基因的核苷酸序列测定以及血清学分型结果，进行疫源地分型和疫区类型演变过程分析。

（三）定期报告、反馈资料

1、按照《中华人民共和国传染病防治法》，出血热为乙类法定管理传染病，

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发现出血热或疑似出血热疫情后，必须按照规定及时进行网上直报。疫情证实后，应通报相邻有关市县（区）乡镇。

2、县级疾病预防控制机构每月10日前将前一月出血热个案调查表录入数据库，并逐级汇总上报至省疾病预防控制中心。宿主动物监测数据在每次监测完毕后15日将半年总结上报（上下半年各上报一次），数据表格均以电子文档的形式上报至省疾控中心流病科，具体表格内容由省疾控制定。

3、血清学试验应随时进行，并将血清诊断结果立即录入个案调查表数据库。 4、省疾病预防控制中心每年7月15日和次年1月15日将病原学监测结果（包括核酸检测、病毒分离、序列测定）、鼠密度和鼠感染情况监测结果（附表2、3）报中国疾病预防控制中心并向各监测点反馈。

七、监测系统质量控制指标

1、人员培训：每年对国家级和省级监测点所在县有关业务人员进行1次培训，由省疾病预防控制中心具体实施。

2、病原学试验的核实工作：省疾病预防控制中心所分离的汉坦病毒送中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所进行鉴定。

3、技术资料档案管理，原始记录，总结等。 八、附件

附表1 肾综合征出血热个案调查表 附表2 宿主动物调查统计报表 附表3 宿主动物感染情况报表 附表4 病原学检测结果一览表

附件1 IgM捕捉ELISA法（MacELISA）检测出血热IgM抗体 附件2 IgM捕获法胶体金标记试纸条快速检测IgM抗体 附件3 免疫荧光法（IFA）检测人血清IgG抗体 附件4 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IgG抗体 附件5 Vero E6或Vero细胞分离汉坦病毒 附件6 RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型 附件7 交叉保护中和实验 附件8 免疫荧光法检测鼠肺抗原

附件9 酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗原夹心法检测血清总抗体

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附表1

肾综合征出血热个案调查表

县（市）名称： 国标码：□□□□□□ 病例编号：□□□□□ 一、基本情况

1. 患者姓名：_________ （如患者年龄<14岁，则家长姓名：_____________） 2. 性别：1男，2女 □ 3. 年龄：_____岁 □□□ 4. 民族：1汉族，2壮族，3维吾尔族，4其他少数民族 □ 5. 职业： □ （1）幼托儿童（2）散居儿童（3）学生（4）教师（5）保育保姆（6）饮食从业人员 （7）商业服务（8）医务人员（9）工人（10）民工（11）农民（12）牧民 （13）渔（船）民（14）干部职员（15）离退人员（16）家务待业（17）其他

6．所在单位：___________________________________；联系电话：_________________ 7．家庭住址：____省（自治区/直辖市）____县（市区）_____乡（镇/居委会）____村（街道）

二、发病情况

1. 发病日期：_______年______月_______日 □□□□/□□/□□ 2. 就诊日期：_______年______月_______日 □□□□/□□/□□ 3. 发病地点：_________________________________________ 4. 住院医院：____________________

5. 住院号：_____________________ □□□□□□ 6. 住院日期：_______年______月_______日 □□□□/□□/□□ 7. 出院日期：_______年______月_______日 □□□□/□□/□□ 8. 入院诊断： □ 1出血热疑似病例，2临床诊断病例，3实验室确诊病例， 4其他 9、临床诊断日期：_______年______月_______日 □□□□/□□/□□ 10. 出院诊断： □ 1出血热疑似病例，2临床诊断病例，3实验室确诊病例， 4其他 11．临床分型：1轻型，2中型，3重型，4危重型 □ 12. 转归：1 痊愈， 2 好转， 3 死亡（日期：_______年____月____日） □

三、症状和体征及一般实验室检查

1. 起病急：1是， 0否 □ 2. 乏力： 1有， 0无 □ 3. 发热： 1有， 0无 □

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4. 头痛： 1有， 0无 □ 5. 腰痛： 1有， 0无 □ 6. 眼眶痛：1有， 0无 □ 7. 脸红： 1有， 0无 □ 8. 颈红： 1有， 0无 □ 9. 胸红： 1有， 0无 □ 10.关节痛： 1有， 2无 □ 11.全身痛： 1有， 2无 □ 12.腹痛： 1有， 2无 □ 13.腹泻： 1有， 2无 □ 14.便秘： 1有， 2无 □ 15.恶心: 1有， 2无 □ 16.呕吐: 1有， 2无 □ 17.结膜充血: 1有， 2无 □ 18.眼睑浮肿: 1有， 2无 □ 19.黄疸: 1有， 2无 □ 20．腋下/上臂/胸部或其它部位有无皮肤出血点：1有， 2无 □ 如有，则出血点为：1散在，2条/线状，3簇状，4其它_________ □ 21．口腔、鼻腔等处粘膜有无出血点：1有， 2无 □

22. 少尿或无尿： 1有， 2无 □ 23. 低血压： 1有， 2无 □ 24． 休克: 1有， 2无 □ 25. 白细胞计数： 1正常，2增多，3减少，4未做此项检查 □

26. 血小板减少： 1有，2无，3未做此项检查 □ 27. 尿蛋白： 1阳性，2阴性，3未做此项检查，4不详 □ 28． 有无尿膜状物/管型尿/血尿： 1有， 2无 □ 29．束臂试验: 1阳性，2阴性，3未做此项检查，4不详 □ 30．出血时间: 1正常，2延长，3缩短，4未做此项检查，5不详 □ 31. 凝血时间: 1正常，2延长，3缩短，4未做此项检查，5不详 □

四、血清学及病原学检测结果（未做者请注明为“未做”） 项目 标本采集时间 检测方法 检测结果 出血热I 抗体 gG I gM 汉坦病毒分离 五、既往史及家庭情况

1. 既往是否患过此病： 1是，0否，9 不详 □

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如是，诊断单位：______，时间：______年____月____日 □□□□/□□/□□ 2．食物、粮食有无防鼠设备： 1有，0无，9 不详 □ 3. 流行性出血热疫苗预防接种史： 1有，0无，9 不详 □ 如有 ，最近一次接种时间：______年____月____日 □□□□/□□/□□ 4． 有无家庭其他成员出现过类似症状：1有，0无，9 不详 □

如有，最近一例发病时间（患者除外）：____年____月____日 □□□□/□□/□□ 5. 房内有无鼠： 1有，0无 □ 6. 院内有无杂物、草堆等： 1有，0无 □

六、接触史及有关因素调查

1、发病前2个月内是否有外出（或旅游）史： 1 是，2 否 □ 如是 ，到何地：___________；外出时间： 天 □□ 返回时间：____年____月____日 □□□□/□□/□□ 2．发病前1月内是否接触鼠类： 1 是，2 否，9不详 □ 如为1 ，接触方式：1挖鼠洞，2拿鼠，3鼠咬，4鼠尿，5鼠粪， □ 6鼠血污染手 7手被鼠夹打伤 8其他

3. 发病前1月内是否有昆虫叮咬史： 1 是，2 否，9不详 □ 4. 发病前1月内是否吃过被鼠排泄物污染的食物：1 是，2 否，9不详 □ 5. 发病前1月内是否在野外喝过沟（塘）水：1 是，2 否，9不详 □ 6. 发病前1月内是否在鼠洞附近坐卧：1 是，2 否，9不详 □ 7. 发病前1月内是否在场院禾草上坐卧：1 是，2 否，9不详 □ 8. 发病前1月内是否在野外住宿：1 是，2 否，9不详 □ 如是，具体地点： ；

其附近有无鼠、鼠洞或鼠排泄物：1 是，2 否，9不详 □ 铺的类型：1床，2土炕，3地铺，4其他 □ 9． 工作场所有无鼠或鼠排泄物： 1 有，2 无，9不详 □ 10．发病前1月内是否接触过出血热病人血/尿： 1 有，2 无，9不详 □

（病例编号填写说明：年号（两位数）、流水号（后边三位））

调查日期：______年___月___日 调查地点： 调查者：

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附表2

出血热监测宿主动物调查统计报表

监测点名称： 监测点编号：□□□□□□ 捕鼠时间：____年____月____日 □□□□/□□/□□

捕鼠地点：1居民区，2 野外（A田野，B山林，C草原，D河堤，E其他 ） □ 收夹数： 夹次 □□□ 捕鼠总数： 只 □□□ 总鼠密度： ％ □□

主要鼠种及构成情况

鼠种 黑线姬鼠 褐家鼠 大林姬鼠 小家鼠 黑线仓鼠 大仓鼠 黄毛鼠 黄胸鼠 填表时间：______年___月___日

单位（盖章）：___________________________________； 填表人：_________________

鼠数 构成（％） 鼠种 鼠数 构成（％） 13

附表3

出血热监测宿主动物感染情况报表

监测点名称： 监测点编号：□□□□□□ 捕鼠时间：____年____月____日 □□□□/□□/□□ 捕鼠地点：1居民区，2 野外（A田野，B山林，C草原，D河堤，E其他 ）□ 捕鼠总数： 只 □□□ 感染率： ％ □□

主要鼠种及感染情况

鼠种 黑线姬鼠 褐家鼠 大林姬鼠 小家鼠 大仓鼠 黑线仓鼠 黄毛鼠 黄胸鼠 填表时间：______年___月___日

单位（盖章）：___________________________________； 填表人：_________________

鼠数 抗原阳性数 抗体阳性数 阳性率（％） 14

附表4

出血热监测宿主动物带菌率调查表

监测点 注 ： 1、生境：分别填写室内、野外（农田、菜地、河岸、水渠旁、道路旁） 2、鼠种：黑线姬鼠、褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠、社鼠、东方田鼠、鼩鼱等。 3、性别：雌、雄。

4、年龄：幼年、亚成年、成年、老年

采样日期 生境 编号 鼠种 性别 年龄 鼠肺出血热抗原培养结果 鼠血抗体结果 15

附表5 出血热监测病原学检测结果一览表

监测点名称： 国标码：□□□□□□ 标本编号 标本类型 采集日期 采集人 检测结果 核酸检测 病毒分离 序列测定 型别 检测日期 检测人 注：对于核酸检测中的序列测定，报送结果中应包括原始测序彩图文件盒序列文件的电子版拷贝。

填表时间：______年___月___日 单位（盖章）：___________________________________； 填表人：_________________

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附件1

IgM捕捉ELISA法（MacELISA）检测出血热IgM抗体

本试剂盒系采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物，用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为96人份/包装。

试验材料：

（1）抗人IgM抗体（μ链）：用pH9.5的包被液包被酶标板

（2）冻干阳性血清/冻干阴性血清1支， 0.2ml/支，工作浓度为1：10； （3）冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1支， 0.5ml/支，工作浓度为1：20；

（4）冻干小牛血清1支，1ml/支；

（5）浓缩洗液（10倍浓缩）1瓶，50ml；（标本稀释液为含5%小牛血清原倍洗液）；

（6）A/B显色液和终止液各1瓶。

（冻干试剂先用相应量的去离子水溶解，然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用，余下的放-20℃保存）

（7）终止液：4N H2SO4 （8）酶标仪。 检测步骤：

（1）将待检血清用稀释液100倍稀释，加入已包被抗人μ链抗体的酶标板一孔中，100μl/孔，同时加入已1：10稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小时。

（2）弃去血清，用PBS－T漂洗5遍，甩干。

（3）将冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1：10稀释后，加入反应板相应孔内，100μl/孔，37℃水浴孵育1小时。

（4）弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤6次，甩干。

（5）加显色液:于各反应孔内加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分钟。

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（6）加终止液（4NH2SO4）于每反应孔，一滴/孔。 结果判断： （1）目测方法：

阳性对照孔呈明显蓝色，阴性对照孔呈无色，对照成立；若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色（TMB），则标本为出血热IgM抗体阳性，反之阴性。

（2）酶联免疫检测仪检测：

于450nm（TMB）阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即P/N≥2.1，对照成立；若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值≥2.1，则标本为流行性出血热IgM抗体阳性，反之阴性。

（阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，若大于0.05按实际数值计算） 意义：

阳性结果，表明患者新近汉坦病毒感染，用于出血热早期诊断。

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附件2

IgM捕获法胶体金标记试纸条快速检测IgM抗体

适用对象：

本产品适用于人血清或血浆中出血热病毒IgM抗体的快速检测。 检测意义：

检测出血热病毒IgM抗体对于早期诊断出血热急性感染有重要指导意义。 储存条件和有效期：

室温或冰箱（4-30℃）密封保存，有效期18个月。 注意事项：

1. 仅供专业人士使用 2. 严格按照说明书操作 3. 有效期内使用，密封保存

4. 样品中的脂质、溶血及污染的的样品有可能导致错误的结果 样品收集和保存：

采取静脉血于干净未加抗凝剂（若收集血浆则加入抗凝剂）的容器内，静置使血凝固，分离血清备检测，可于4℃冰箱内保存2周；如不能及时检测可将血清置于冰箱内冷冻或冷藏。检测前复温并混匀。避免反复冻融标本。

操作步骤：

1. 如果试剂盒储存于4℃冰箱，请将所有实验用试剂与器材取出并平衡至室温

2. 打开密封的铝箔袋，取出试剂盒，平放于水平桌面上，做好标记 3. 用滴管或加样器从盛有血清或血浆的试管中取2-3滴或100?l-150?l样品滴加于测试盒上的样品孔内，于15分钟内观察测试结果

结果判断：

阳性：可见质控线与实验线2条紫红色带 阴性：只有一条质控线出现

无效：如果未能观察到质控线出现，则无论是否有实验线显示，均为无效，应重新检测

注意：阳性结果最早1-2分钟即可显示出来，但阴性结果必须等到15分钟才可判定。

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附件3

免疫荧光法（IFA）检测人血清IgG抗体

试验材料：

（1）抗原片：家鼠型和姬鼠型汉坦病毒标准毒株感染Vero E6或Vero细胞制备，低温干燥保存；

（2）阳、阴性对照：单克隆抗体或确诊阳性患者恢复期血清（阳性对照）、阴性血清；

（3）羊抗人（或兔抗人）IgG荧光抗体； （4）常用稀释液：pH7.2～7.4PBS、伊文思兰等； （5）荧光显微镜。 检测步骤：

（1）用pH7.4，0.02mol/L PBS稀释待检血清，从1:20开始做2倍或4倍连续稀释至需要的稀释度。

（2）取出抗原片，用蒸馏水漂洗后，冷风吹干。

（3）用加样器依次从高稀释度到低稀释度逐个加入已稀释的待检血清，加入量以覆盖细胞抗原面为准（若为双份血清，最好上排为急性期血清，下排为恢复期血清），在37℃水浴箱湿盒孵育30～40分钟（每次试验同时设阳、阴性对照）。

（4）用PBS震荡洗涤3次，每次5分钟，再用蒸馏水洗涤1次脱盐，冷风吹干。

（5）用含1：3万的伊文思兰PBS按工作浓度稀释荧光结合物，滴加各孔（以覆盖细胞抗原面为准），在37 ℃水浴箱湿盒孵育30分钟，然后同（4）洗涤、漂洗、吹干。

（6）荧光显微镜观察结果。 结果判断：

细胞内病毒特异性荧光为黄绿色颗粒，分布在感染细胞的胞浆内。根据特异性荧光颗粒多少、荧光亮度、阳性细胞在细胞总数中所占比例，可将免疫荧光反应大致区分为1～4个“+”。

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特异性免疫荧光呈黄绿色颗粒，分布在鼠肺上皮细胞胞浆中，正常组织细胞呈橙红色或暗红。

意义：阳性结果，说明宿主动物带毒。

附件9

酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗原夹心法检测血清总抗体

试验材料：

（1）纯化的重组汉坦病毒核蛋白抗原预包被酶标板： （2）辣根过氧化物酶标记的纯化的重组汉坦病毒核蛋白抗原； （3）缓冲液：

包被液：pH9. 6碳酸缓冲液； 稀释液：pH7.4 PBS（含5%脱脂奶） 洗涤液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐温－20）； （4）显色液：A/B液 （5）终止液：4N H2SO4 （6）酶标板、酶标仪。 检测步骤：

（1）将待检血清加入抗原孔，25μl/孔，同时用稀释液按工作浓度稀释酶标抗原，加入样品孔，25μl/孔，需设阴、阳性对照各3孔，37℃水浴1小时；

（2）用洗涤液洗涤6次，甩干；

（3）加显色液：于各反应孔内加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分钟； （4）加终止液于每反应孔，一滴/孔。 结果判断：

于450nm（TMB）阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD均值，即P/N≥2.1，对照成立；若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值≥2.1，则标本为出血热抗体阳性，反之阴性。（阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，若大于0.05按实际数值计算）

意义：阳性结果，表明曾受到汉坦病毒感染。

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