女贞子炮制前后5-羟甲基糠醛的含量变化(2)

　　2.1  炮制品的制备生品：去除枝梗后干燥成熟的女贞果实；清蒸品：净女贞子100 g，置蒸锅内分别蒸4，8 h，取出干燥；酒蒸品：净女贞子100 g，加黄酒20 ml，拌匀，闷润后置蒸锅内分别蒸4，8 h，取出干燥；酒炖品：净女贞子100 g，加黄酒20 ml，拌匀，密闭，闷润后置蒸锅内分别炖4，8 h，取出干燥。

　　2.2  5-HMF的含量测定

　　2.2.1  对照品溶液的制备精密称取5-HMF对照品5.98 mg，置25 ml的棕色容量瓶中，加无水甲醇至刻度，配成浓度为0.239 2 mg·ml-1的标准储备液。精密量取5-HMF标准储备液1.0 ml，置25 ml的棕色容量瓶中，加无水甲醇至刻度，配成浓度为9.568 μg·ml-1的对照品溶液，摇匀，备用。

　　2.2.2  供试品溶液的制备精密称取样品粉末（过40目筛）1.0 g，精密加80%甲醇20 ml，称重，室温超声20 min，放置，加80%甲醇补足重量，摇匀，过滤，然后过0.45 μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液，备用。

　　2.2.3  色谱条件色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-水（12∶88），流速：1.0 ml·min-1，柱温：25 ℃；检测波长：284 nm，进样量：10 μl。

　　2.2.4  方法学考察标准曲线的绘制：分别精密吸取5-HMF对照品溶液1，2，4，6，8，10 μl，注入高效液相色谱仪，分别在上述色谱条件下测定峰面积。以标准品质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程：Y=7 568.8X+9.106 6，r=0.999 9。结果表明，5-HMF在9.568×10-3～95.68×10-3 μg范围内线性关系良好。
   
　　精密度实验：取9.568 μg·ml-1的5-HMF对照品溶液连续进样6次，每次10 μl，测定峰面积，结果RSD为0.80%，表明仪器精密度良好。   
　　重复性实验：精密称取酒炖8 h女贞子饮片1.0 g，照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μl，测定峰面积，结果RSD为2.73%，表明该方法重复性良好。
   
　　稳定性实验：精密称取酒炖8 h女贞子饮片0.999 5 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，于配置后0，2，4，6，8，10 h分别进样10 μl，测定峰面积，计算RSD为1.89%，表明供试品溶液在10 h内稳定。
   
　　回收率实验：精密称取酒炖8 h女贞子饮片0.5 g，加入浓度为0.239 2 mg·ml-1的对照品储备液100 μl，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，进样10 μl测定峰面积，重复6次，计算平均回收率为100.03%，RSD为2.70%。

　　2.2.5  炮制品含量测定将不同蒸制方法制备的女贞子炮制品，照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μl，依法测定峰面积，计算含量。色谱图见图1，结果见表1。表1  女贞子样品5-HMF含量测定结果（略）

　　3  讨论
   
　　由实验结果可知，女贞子生品不含5-HMF，蒸制后产生，其含量依次为酒炖8 h＞清蒸8 h＞酒炖4 h＞清蒸4 h＞酒蒸8 h＞酒蒸4 h。即相同蒸制时间下，酒炖品＞清蒸品＞酒蒸品。若蒸制方法相同，则随蒸制时间的延长5-HMF含量明显升高。表明蒸制方法和蒸制时间对女贞子中5-HMF含量的影响不同。
   
　　酒炖品收率和5-HMF含量均明显高于清蒸品和酒蒸品，可能与密闭蒸时可防止酒的挥散及水溶性成分流失有关。表明女贞子传统常采用酒炖的方法炮制具有一定的科学性。

    本文建立了女贞子中5-HMF 的HPLC含量测定方法，该方法操作简单，结果稳定可靠，可为女贞子的质量控制提供科学依据。

    女贞子蒸制过程中5-HMF含量的变化规律与糖类成分的变化之间的关系以及与补益作用增强的关系正在进一步研究中。

【参考文献】

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