2.4 线性关系考察
取东莨菪素对照品适量,加甲醇分别制成每1 mL含东莨菪素对照品5、10、15、20、25、30 μg的溶液,分别吸取20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。以峰面积(A)为纵坐标,以质量浓度(ρ)为横坐标,绘制东莨菪素标准曲线,得回归方程A=1.5848ρ+0.0172(r=0.999 9)。结果表明:东莨菪素质量浓度在5~30 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
取伞形花内酯对照品适量,加甲醇分别制成每1 mL含伞形花内酯对照品7.5、15、22.5、30、37.5、45 μg的溶液,分别吸取20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。以峰面积(A)为纵坐标,以质量浓度(ρ)为横坐标,绘制伞形花内酯标准曲线,得回归方程A=1.1067ρ+0.2571(r=0.9996)。结果表明:伞形花内酯质量浓度在7.5~45 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 专属性试验
取按处方比例缺水母雪莲的阴性对照样品、东莨菪素对照品、伞形花内酯对照品、供试品按“2.1”项下色谱条件进样测定,色谱图见图1 。结果表明,阴性对照样品的色谱图在东莨菪素和伞形花内酯保留时间的相应位置上无色谱峰出现,表明此方法专属性强,阴性对照无干扰。
A.东莨菪素对照品;B.伞形花内酯对照品;C.雪隆胶囊;D.雪莲阴性对照品
图1 高效液相色谱图(略)
Figure 1 HPLC chromatogram
2.6 精密度试验
分别取上述对照品溶液各20 μL,重复进样5次依法测定,计算东莨菪素对照品峰面积的RSD为1.77%,伞形花内酯对照品峰面积的RSD为0. 95%,表明精密度较好。
2.7 稳定性试验
取供试品溶液,室温下分别放置0、1、4、8、12、24 h后,依法操作,测定峰面积,计算东莨菪素峰面积的RSD为2.25%,伞形花内酯峰面积的RSD为1.20%,表明稳定性较好。
2.8 重复性试验
精密称取雪隆胶囊样品(批号050901)6份,按“2.3”项下方法制备溶液,进样测定,计算得东莨菪素的平均含量为7.83 mg·粒-1,RSD为1.26%,伞形花内酯为14. 49 mg·粒-1,RSD为0.65%,表明方法重复性较好。
2.9 加样回收率试验
精密吸取已知含量的样品(批号:050901,东莨菪素的含量为7.83 mg·粒-1,伞形花内酯的含量为14.49 mg·粒-1)适量,再分别精密加入一定量的对照品,按样品测定项下操作,依法测定,计算回收率,结果见表1、表2。
2.10 样品含量测定
取供试品3批,按“2.3”项下方法制备溶液,进样测定,结果见表3。
表1 东莨菪素回收率试验结果(略)
Table 1 Recovery test of scopoletin
表2 伞形花内酯回收率试验结果(略)
Table 2 Recovery test of umbelliferone
表3 雪隆胶囊的含量测定结果(略)
Table 3 Contents of scopoletin and umbelliferone in the capsules
3 讨论
本文采用高效液相色谱法进行含量测定,对雪隆胶囊中的重要成分东莨菪素和伞形花内酯在同一色谱条件下进行测定,方法简便、准确,灵敏度、重现性、回收率均符合要求。
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