1.3 实验动物ICR小鼠(长沙市开福区实验动物科技服务部提供,动物合格证号：湘000468)。
1.4 实验数据处理软件
实验数据均在LENOVO-compatible PC 机Windows XP系统下采用Excel2003进行计算和统计学处理，并用T-test来分析组间差异的显著性。结果以±s表示。文字处理软件用Microsoft Word2003。
2 方法
2.1 多糖的提取分离
2.1.1 预处理脱脂
取60 g白首乌Cynanchum auriculatum Royle ex Wight粉末,加180 ml乙醇(85%),加热回流1 h，过滤，滤渣于恒温箱中80℃干燥过夜［2］，得淡黄色滤渣52.5 g。
2.1.2 初多糖的提取浸提
将黄色滤渣52.5 g均分于两个1 000 ml圆底烧瓶中,A瓶为26.2 g，B瓶为26.3 g。A、B瓶各加520 ml水,在恒温水浴中回流1 h，过滤，滤渣在相同条件下重复浸提1次，合并滤液。
离心：将两次浸液离心机离心10 min(2 500 r/min)，合并滤液。
减压浓缩：将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至75 ml。
真空干燥：在浓缩后的多糖溶液中加入3倍量95％乙醇（AR）225 ml，抽滤，真空干燥后得淡黄色粗多糖。
2.2 粗多糖的纯化
2.2.1 脱蛋白
粗多糖加蒸馏水200 ml复溶后经过Sevag试剂(氯仿20 ml，正丁醇4 ml)除蛋白，连续操作4次,得150 ml多糖溶液。
2.2.2 醇沉
在脱蛋白后的多糖溶液中加入3倍95％乙醇，沉淀用乙醇洗涤3次，经抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。
2.2.3 纯化
将灰白色结晶用乙醇、丙酮及乙醚反复洗涤，抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。
2.3 多糖的验证
2.3.1 多糖检测反应
取多糖粉末少许用蒸馏水溶解，取1 ml于试管中，再加10% α-萘酚的乙醇溶液3滴，均匀混合，沿管壁加浓硫酸1 ml，使集于下层，在两层交界面有棕色环出现，证明此为多糖。
2.3.2 水解
取上述粉末20 mg置锥形瓶内，加入2 mol／L的硫酸甲醇溶液2 ml，封口，置85℃水浴中水解24 h，冷却，用饱和Ba(OH)2中和，离心，取上清液，减压浓缩至干，待用。
2.3.3 单糖组分的纸色谱层析
用微量点样器分别取样品水解液和标准葡萄糖液各4～5 μl，在纸色谱上点样，置于展开筒中展开，展开系统为:正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5) 上层, 自然风干后用邻苯二甲酸苯胺显色，样品水解液出现4个棕色点，如图1，其中有一个点与标准葡萄糖溶液的点Rf值一样,说明样品中确含多糖。
2.4 药理实验
2.4.1 动物分组
取84只ICR健康小鼠（雌雄各半），随机分为6组，分别为正常对照组、模型组、阳性对照组，多糖低、中、高剂量给药组(500，250，100 mg/kg)。
2.4.2 给药
实验室适应性饲养7 d后，浏阳河酒灌胃0.5 ml/只。多糖高、中、低剂量给药组分别按500，250，100 mg/kg 灌胃提取的精制耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight多糖溶液；阳性对照组按80 mg/kg灌胃护肝片溶液；正常对照组和模型对照组等体积生理盐水灌胃，1次/d，2.0 ml/只，连续8 d。第8天摘眼球取血分离血清［6］。
2.4.3 取血
采用摘眼球取血方法，每只试验用小鼠各取血1 ml于肝素润洗过的1.5 ml中。
2.4.4 分离血清
将离心管置高速离心机中3 000 r/min离心10 min，用微量注射器提取血清置肝素润洗过的0.5 ml离心管中，置-30℃冷冻保存备用。
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