PTEN基因在原发性肝细胞癌中的表达(2)
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1.2.2 PCR产物定量及分析 取10 μL扩增产物于含EB（0.5 mg／L）的20 g/L琼脂糖凝胶中电泳，用DL2000作为分子质量标准，紫外线透射仪观察结果并拍照。用激光密度扫描仪扫描电泳条带，采用德国欧波同公司VIDAS图像分析系统计算电泳条带吸光度值，作为PCR产物相对含量。用PTEN吸光度与GAPDH吸光度的比值表示PTEN基因的相对表达量，比较PTEN基因在肝癌、癌旁组织和正常肝组织中表达水平的差异，以及PTEN表达水平与其他一些临床病理因素的关系。
1.2.3 统计学处理 采用χ2检验、方差分析及t检验。
2 结 果
2.1 PTEN基因PCR产物电泳
肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中PTEN基因各片段与GAPDH 同时扩增，PCR产物电泳结果见图1～4。外显子19扩增片段长度为1 233 bp，59为920 bp，58为620 bp，18为933 bp。另外，GAPDH扩增片段长度为450 bp。
2.2 PTEN基因表达水平的比较
30例肝癌组织中，有26例检出PTEN基因的 表达，检出率为86.7%，有3例同时出现引物19、59缺失，1例发现引物18、19、58、59 RTPCR扩增产物缺失现象，癌旁组织及16例正常肝组织中PETN基因全部表达，肝癌组织与癌旁组织、正常肝组织间PTEN阳性表达率比较，差异无显著性（χ2＝1.073, P>0.05）。
肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中PTEN基因表达水平（PTEN/GAPDH比值）分别为1.619±0.407、1.302±0.343、1.232±0.386。肝癌组织与癌旁组织及正常肝组织比较，差异有显著性（F＝6.785，q = 4.269、4.549，P<0.05），而癌旁组织与正常肝组织比较，差异无显著意义（q=0.823，P>0.05）。
2.3 PTEN基因表达水平与部分临床病理因素的关系
低分化肝癌PTEN基因表达水平显著低于高、中分化肝癌；PTEN基因表达水平与有无肝内转移卫星灶及病人的年龄、性别无显著相关性。见表1。表1 PTEN基因表达水平与部分临床病理因素的关系
3 讨 论
HCC是我国高发而且病死率极高的一种恶性肿瘤，其发病机制尚不清楚，在HCC发生过程中，多种原癌基因激活和抑癌基因失活，导致其编码的蛋白质发生质和量的改变，从而引起细胞的恶变。因此，对抑癌基因的研究在探索肿瘤发生发展的分子生物学机制方面有重要的意义。PTEN基因位于10q23.3，是第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，该基因的突变失活与人类大多数肿瘤如卵巢上皮样癌、乳癌、前列腺癌、黑色素瘤等的发生发展密切相关［4］。肝细胞癌10q杂合性缺失频率达33% 左右，提示HCC中PTEN基因可能发生突变失活［5］。研究PTEN基因在HCC发生中的作用，有助于进一步阐明HCC发生的分子机制。 PTEN基因突变在神经系统等恶性肿瘤中突变率较高，但是在大多数肿瘤中突变率是不高的。如在前列腺癌中有中度突变率，而在乳腺、甲状腺、膀胱、肺及血液系统的恶性肿瘤中突变率较低。然而PTEN在多数肿瘤中有失表达或表达减少的情况，提示除了突变和缺失，PTEN还有其他一些失活机制，导致其在mRNA和蛋白水平上低表达或表达缺失。本研究在以往研究的基础上，使用半定量RTPCR法，从mRNA水平检测了PTEN基因在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的表达情况。较免疫组化法而言，RTPCR法步骤简单，在一定程度上可弥补后者能够引起假阴性的不足。本文结果显示，在肝癌组织中PTEN mRNA的阳性表达率为86.7%，癌旁组织及正常肝组织中PTEN mRNA阳性表达率均为100%，三种组织间差异无显著性。将不同组织中表达的mRNA进行半定量分析，结果表明PTEN mRNA在癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织及正常组织, 提示PTEN表达水平降低与HCC发生密切相关，与以往的研究结果相符［6］。本研究还分析了PTEN基因表达水平与部分临床病理因素的关系，发现PTEN表达水平与病人的年龄、性别及肝内转移卫星灶无显著的相关性，而与肝癌分化程度密切相关。一般认为HCC的分化程度是一个较好的预后判断指标，因此，肝癌组织中PTEN mRNA表达水平对于判断预后及指导治疗用药有一定的参考意义。
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