低氧诱导因子1α在大鼠脑缺血耐受中的表达

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【摘要】目的探讨脑缺血耐受中低氧诱导因子1α（HIFlα）的表达。方法 84只Wistar大鼠随机分成对照组（SS+SS组，4只），假手术组（SS+MCAO组，40只）和缺血预处理组（IP+MCAO组，40只）。线栓法阻塞大脑中动脉建立缺血预处理模型，分别于预缺血后1、3、7、14、21 d再缺血2 h，然后取脑经苏木精伊红染色后光镜下进行病理观察，免疫组化方法检测脑组织HIF1α蛋白的表达。结果 IP+MCAO组中1、3、7 d的HIF1α蛋白表达水平与SS+MCAO组中相应时间点比较，差异具有显著性（t=2.449～9.898，P＜0.05）。结论 HIF1α在脑缺血耐受中表达上调，可能是导致脑缺血耐受的分子机制之一。
【关键词】低氧诱导因子1 缺血预处理缺血低氧脑大鼠
［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expression of hypoxia inducible factor1α (HIF1α) in the brain ischemic model of rats.MethodsHealthy Wistar rats (n=84) were randomly divided into three groups, the shamsurgery group (SS+SS，n=4），the sham and middle cerebral artery occlusion (MCAO) group (SS+MCAO,n=40) and the ischemic preconditioning and MCAO group (IP+MCAO,n=40). A rat model of focal ischemic preconditioning was established via occlusion of middle cerebral artery. At day 1, 3, 7, 4, and 21 after the preconditioning, another two hours of ischemia were given to each experimental animal. The pathology was evaluated by HE staining. The volumes of infarct area were measured, and the expression of the HIF1α detected via immunohistochemical technique.ResultsThe levels of HIF1α expression in rats of IP+MCAO group at day 1, 3, and 7 after the preconditioning were significantly higher than those of the SS+MCAO groups (t=2.449-9.898，P<0.05）.ConclusionThe expression of HIF1α is upregulated, which may be one of the molecular mechanisms in the brain ischemic tolerance.
    ［KEY WORDS］hypoxia inducible factor 1; ischemic preconditioning; hypoxiaischemia, brain; rats
    近年研究显示，短暂性脑缺血对神经细胞起保护作用，可抵御其后发生的严重脑缺血，即诱发了脑缺血耐受（IT）[1]，对其作用机制的探索已成为近年脑血管病研究的热点问题。本实验采用线栓法制备脑缺血耐受模型，通过神经功能评分、苏木精伊红（HE）染色观察病理学改变等对模型进行评估，并通过免疫组化方法检测脑缺血耐受过程中低氧诱导因子1α（HIFlα）的表达，探讨其在脑缺血耐受机制中的作用。
    1 材料和方法
    1.1 实验动物及分组
    健康雄性Wistar大鼠84只，体质量250～300 g。随机分成3组。缺血预处理组（IP＋MCAO组，40只）：预缺血10 min后按再灌注不同时间（1、3、7、14、21 d）分为5个亚组；假手术组（SS+MCAO组，40只）：分按前述时间点5个亚组；对照组（SS+SS组，4只）。
    1.2 模型的制备
    缺血预处理参照文献[2,3]方法进行。再缺血的处理按再灌注的不同时间在规定时间点再次麻醉大鼠，将埋在皮下的线栓推进（18.5±2.0）mm ，再次阻断大脑中动脉造成MCAO，重新结扎ECA近心端，缝合皮肤，2 h后将留在皮外的线栓退出至ECA，形成第2次再灌注，完成再缺血处理。
    1.3 实验方法
    IP＋MCAO组预缺血10 min后，分别于再灌注1、3、7、14、21 d后阻塞大脑中动脉2 h，再灌注22 h 后处死；SS+MCAO组假手术代替预缺血，在假手术后按前述不同时间点阻塞大脑中动脉2 h, 再灌注22 h后处死；SS+SS组两次均为假手术。

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