正交实验优选冠通贴剂乙醇回流工艺

                 作者：吴金伟，何宇新，马育彪，米之金

【摘要】  目的优选出冠通贴剂的乙醇回流条件。方法采用正交实验法，以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标，对淫羊藿等3味药材乙醇回流的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。结果最终确定最佳工艺为加70%乙醇10倍，提取两次，1.5 h/次。结论用此工艺进行验证试验，表明此工艺合理稳定,可以为工业生产提供理论基础。

【关键词】  淫羊藿苷； 浸膏得率； 正交实验； 高效液相色谱

冠通贴剂由淫羊藿、丹参、贯叶连翘3味中药制成的透皮贴剂，具有增加冠脉流量，扩张外周血管的功效。方中君药为淫羊藿，淫羊藿主要含淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷（ICA）、生物碱、维生素E等成分，其中淫羊藿苷能明显抑制心肌收缩力,降低心肌耗氧量，降低外周阻力，降低心脏负荷，这对于冠心病患者来说是十分有利的［ 1］。所以本文用正交实验法，以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标，对乙醇回流提取的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。

　　1  材料与仪器

　　1.1  材料  

　　淫羊藿、丹参、贯叶连翘购自四川省成都市西南药都，经鉴定，药材符合《中国药典》2005版要求。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所（110737-200414）。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

　　1.2 仪器 

　　岛津LC-20型高效液相色谱仪，主要组成部分为LC-20AB型泵、SIL-20AC自动进样器、SPD-M20A紫外检测器。色谱柱：UltimateTM XB-C18（5 μm,4.6 mm×250 mm），成都思为科学仪器有限公司产品。

　　2  方法

　　2.1  测定条件［2］ 

　　流动相为乙腈-水（30 ∶70）；检测波长270 nm；流速1 ml/min;进样量10 μl；柱温35℃。

　　2.2  正交实验以淫羊藿苷含量和浸膏得率为指标，考察乙醇回流影响因素：乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数。采用L9（34）正交表进行实验。因素水平见表1。表1  因素水平（略）

　　2.3  淫羊藿苷含量测定

　　2.3.1  标准品的配制

　　精密称取60℃干燥至恒重的淫羊藿苷标准品5.2 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，得浓度为0.104 mg/ml的标准品溶液。

　　2.3.2 供试品溶液的制备

　　称取淫羊藿、丹参、贯叶连翘各适量，按照表1～2进行正交实验。过滤，分别定容，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，即得供试品溶液。表2  正交实验（略）

　　按下列公式计算总评分：浸膏得率加权评分（y1）=（浸膏得率/最大浸膏得率）×20
       
　　淫羊藿苷含量加权评分（y2）=（淫羊藿苷含量/最大淫羊藿苷含量）×80
       
　　总评分=y1 + y2
   
　　结果见表2 正交实验直观分析表，方差分析结果见表3。表3  方差分析结果（略）

　　2.3.3  阴性样品的制备

　　取丹参药材、贯叶连翘适量，同5号试验制备。

　　2.3.4  测定波长的确定

　　取标准品溶液，进样10 μl，在180～820 nm波长范围内扫描，可见标准液在270 nm处有最大吸收峰，故确定检测波长为270 nm。

　　2.3.5  线性关系考察

　　分别用标准溶液进样2，4，8，16，20 μl进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。淫羊藿苷在0.208～2.08 μg之间线性关系很好。回归方程为：Y= 237 522X- 262.77，r=0.999 9。

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