正交实验优选冠通贴剂乙醇回流工艺

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                 作者:吴金伟,何宇新,马育彪,米之金

【摘要】  目的优选出冠通贴剂的乙醇回流条件。方法采用正交实验法,以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标,对淫羊藿等3味药材乙醇回流的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。结果最终确定最佳工艺为加70%乙醇10倍,提取两次,1.5 h/次。结论用此工艺进行验证试验,表明此工艺合理稳定,可以为工业生产提供理论基础。

【关键词】  淫羊藿苷; 浸膏得率; 正交实验; 高效液相色谱

冠通贴剂由淫羊藿、丹参、贯叶连翘3味中药制成的透皮贴剂,具有增加冠脉流量,扩张外周血管的功效。方中君药为淫羊藿,淫羊藿主要含淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷(ICA)、生物碱、维生素E等成分,其中淫羊藿苷能明显抑制心肌收缩力,降低心肌耗氧量,降低外周阻力,降低心脏负荷,这对于冠心病患者来说是十分有利的[ 1]。所以本文用正交实验法,以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标,对乙醇回流提取的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。

  1  材料与仪器

  1.1  材料  

  淫羊藿、丹参、贯叶连翘购自四川省成都市西南药都,经鉴定,药材符合《中国药典》2005版要求。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所(110737-200414)。乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

  1.2 仪器 

  岛津LC-20型高效液相色谱仪,主要组成部分为LC-20AB型泵、SIL-20AC自动进样器、SPD-M20A紫外检测器。色谱柱:UltimateTM XB-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm),成都思为科学仪器有限公司产品。

  2  方法

  2.1  测定条件[2] 

  流动相为乙腈-水(30 ∶70);检测波长270 nm;流速1 ml/min;进样量10 μl;柱温35℃。

  2.2  正交实验以淫羊藿苷含量和浸膏得率为指标,考察乙醇回流影响因素:乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数。采用L9(34)正交表进行实验。因素水平见表1。表1  因素水平(略)

  2.3  淫羊藿苷含量测定

  2.3.1  标准品的配制

  精密称取60℃干燥至恒重的淫羊藿苷标准品5.2 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,得浓度为0.104 mg/ml的标准品溶液。

  2.3.2 供试品溶液的制备

  称取淫羊藿、丹参、贯叶连翘各适量,按照表1~2进行正交实验。过滤,分别定容,用微孔滤膜(0.45 μm)过滤,即得供试品溶液。表2  正交实验(略)

  按下列公式计算总评分:浸膏得率加权评分(y1)=(浸膏得率/最大浸膏得率)×20
       
  淫羊藿苷含量加权评分(y2)=(淫羊藿苷含量/最大淫羊藿苷含量)×80
       
  总评分=y1 + y2
   
  结果见表2 正交实验直观分析表,方差分析结果见表3。表3  方差分析结果(略)

  2.3.3  阴性样品的制备

  取丹参药材、贯叶连翘适量,同5号试验制备。

  2.3.4  测定波长的确定

  取标准品溶液,进样10 μl,在180~820 nm波长范围内扫描,可见标准液在270 nm处有最大吸收峰,故确定检测波长为270 nm。

  2.3.5  线性关系考察

  分别用标准溶液进样2,4,8,16,20 μl进行测定,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标绘制标准曲线。淫羊藿苷在0.208~2.08 μg之间线性关系很好。回归方程为:Y= 237 522X- 262.77,r=0.999 9。

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