分别于注射药物前1 d及实验第5天称取并记录每只大鼠的体质量，同时记录24 h尿量。实验第5天在收集24 h尿液后，行乙醚吸入麻醉摘眼球取血，颈椎离断处死大鼠，解剖取肾，左肾用40 g/L的甲醛固定，常规石蜡切片及苏木精伊红染色，右肾用于制备100 g/L肾组织匀浆。
1.3 各指标的检测方法
应用全自动生化分析仪分别测定血清中尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）的含量。采用南京建成生物工程研究所提供的相应试剂盒检测尿N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶（NAG）的活性和血清、肾组织匀浆中丙二醛（MDA）的含量及过氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSHPx）的活性。
1.4 肾组织形态学观察
采用HOUGHTON等[5]的方法观察切片，将病变分为0～4级。0级：肾组织结构无异常；1级：肾小管上皮细胞局灶性颗粒空泡变性，小管腔中出现颗粒状碎屑，有或无小灶状上皮脱落（<1％的肾小管出现上皮脱落）；2级：1%～50％的皮质肾小管出现上皮坏死及脱落；3级：>50％的近端小管出现上皮坏死及脱落，但易见到完好的近端肾小管；4级：完全或几乎完全的近端小管坏死。
1.5 统计学处理
组织学分级比较用等级分组秩和检验，其余各组数据用±s表示，应用SPSS 11.5统计学分析软件对所得数据进行统计学处理。
2 结 果
2.1 大体观察
实验期间各组大鼠均无死亡。GM组及GM+MLT组动物精神较萎靡、进食减少，皮毛光泽度较差，未见腹泻。GM组和GM+MLT组大鼠肾脏较Cont组颜色浅红，水肿较明显。
2.2 各组大鼠体质量和尿量的变化
用药后，GM组和GM+MLT组大鼠的体质量明显下降（t＝4.95、5.40，P<0.01），24 h尿量则明显增多（t＝-5.43、-4.57,P<0.01），而Cont组体质量和24 h尿量均无明显变化。见表1。表1 各组大鼠用药前后体质量及尿量的变化
2.3 各组大鼠肾功能指标和尿NAG的变化
GM组和GM+MLT组大鼠血BUN、Scr和尿NAG与Cont组比较均有显著性升高（t＝－22.37～－6.15，P<0.01），且GM组和GM+MLT组相比也有显著意义（t＝3.91～9.55，P<0.01）。见表2。表2 各组大鼠血BUN、Cr含量及尿NAG活性变化
2.4 各组大鼠肾组织氧化活性物质及氧自由基清除酶的变化
与Cont组比较，GM组大鼠肾组织氧化活性物质MDA的含量明显升高，氧自由基清除酶SOD、GSHPx的活性显著下降，二者比较差异有显著性（t＝－8.35～15.53，P<0.01）；GM+MLT组与GM组比较，MDA含量显著减少，SOD、GSHPx活性升高（t＝－10.41～5.23，P<0.01）。见表3表3 各组大鼠血清和肾组织匀浆中MDA、SOD、GSHPx含量的变化
2.5 组织形态学改变
在光学显微镜下，Cont组大鼠肾脏的组织形态结构均正常（图1），组织形态学评分均为0级；GM组和GM+MLT组大鼠均为近端肾小管上皮细胞坏死、脱落，肾小管腔内可见蛋白管型。GM+MLT组大鼠病变较GM组轻，其肾组织形态学评分大部分为2级，1%～50％的近端肾小管出现上述病变（图2）；GM组大鼠评分大多为4级，几乎全部的近端小管有坏死脱落（图3）。3组大鼠肾组织形态学分级比较差异有显著性。
3 讨 论
3.1 GM的肾损伤作用及其可能的机制
本实验中GM组和GM+MLT组的形态学和功能学检查显示符合GM急性肾损伤动物模型[6]。GM组BUN、Sr明显增高，且用药后24 h尿量明显增多，证实GM所致急性肾衰竭为非少尿型；光镜下可观察到近端肾小管上皮细胞广泛坏死脱落，而肾小球、远端小管和集合管在实验中无明显变化，这与相关实验中的电镜观察是一致的[6]，证实损伤部位主要位于近端小管。NAG是一种酸性水解酶，主要存在于近端小管上皮细胞的溶酶体内，尿中NAG活性增高与近端小管的大量坏死相符合，损伤越重，NAG越高。
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