半夏蛋白及其基因研究进展(2)

　　［20］梁永恒, 刘小川, 傅强. 两种半夏蛋白及凝集素抑制褐飞虱与番茄花叶病毒初报［J］. 湖南农业科学, 2007,2:93.

　　［21］Yao JH, Zhao XY, Liao ZH, et al. Cloning and molecular characterization of a novel lectin gene from Pinellia ternata［J］. Cell Res, 2003, 13(4): 301.

　　［22］Lin J, Yao JH, Zhou XW, et al. Expression and purification of a novel mannose-binding lectin from Pinellia ternata［J］. Molecular Biotechnology, 2003, 25: 215.

　　［23］Lin J, Zhou X, Gao S, et al. cDNA cloning and expression analysis of a mannose-binding lectin from Pinellia pedatisecta［J］. J Biosci, 2007, 32(2): 41.

　　［24］Yao JH, Pang YZ, Qi HX, et al. Transgenic tobacco expressing Pinellia ternata agglutinin confers enhanced resistance to aphids［J］. Transgenic Research, 2003, 12: 715.

　　［25］张红宇, 吴先军, 唐克轩, 等. 半夏凝集素基因(pta)导入水稻及其表达的初步研究［J］. 遗传学报, 2003, 30(11): 1013.

　　［26］许铁峰,张磊,刘成洪, 等. 四倍体菘蓝转抗虫基因研究Ⅱ.转半夏凝集素基因菘蓝的分子生物学检测［J］. 中草药, 2003, 34(9): 846.

                  作者：徐陶，杜娟， 谢丽霞， 李尚伟 

【摘要】  　　半夏蛋白是一种从半夏属块茎中分离纯化出的植物蛋白，它是能与甘露糖专一结合的植物凝集素。半夏蛋白具凝血、抗生育、抗肿瘤、杀虫等多种生物学功能。文章综述了半夏蛋白的分离提取、成分结构和性质及其基因工程方面的研究现状，并对半夏蛋白的利用现状和前景也做了简单的论述。

【关键词】  半夏蛋白； 凝集素； 抗生育； 抗肿瘤； 抗虫； 基因工程

　　半夏是我国重要的中药材，其入药首载于《神农本草经》，主要以块茎入药，具有抗早孕、抗肿瘤、镇咳、抗溃疡、抗心律失常、降血脂、镇静催眠、解毒抗炎等药理作用。另外，在我国民间也有作为杀虫剂使用的记载。半夏的化学成分有半夏蛋白、生物碱、半夏淀粉、甾醇类、氨基酸、挥发油、芳香族成分、有机酸类、黄酮类、鞣质以及多种微量元素等［1～3］，半夏蛋白是半夏的主要药效成分之一。
   
　　半夏蛋白(pinellin)是一种从半夏属块茎中分离纯化出来的植物蛋白，它是一种植物凝集素，能与甘露糖专一性结合，具有凝血、抗肿瘤、抗生育、杀虫等重要的药理作用，已成为近年来研究的热点。

　　1  半夏蛋白的分离与纯化
   
　　最早研究半夏蛋白分离提取的是20世纪 80 年代陶宗晋等［4］，其所采用的硫酸铵盐析与温差结晶相结合的方法被认为是提取半夏蛋白的经典之作。其操作步骤是榨取三叶半夏块茎鲜汁，冻融去除不溶物；加饱和的硫酸铵沉淀，在室温下盐析后过滤，再经透析处理，溶液置于 10℃ 过夜，离心得到蛋白质溶液；然后在 28～30℃ 下结晶，24 h 开始出现晶体，一星期便可完全结晶；将所得结晶蛋白用硫酸铵透析平衡去除去沉淀，再用磷酸缓冲液透析, 在室温下半夏蛋白晶体便可沿透析袋壁析出。
   
　　首次从掌叶半夏中提取出半夏蛋白的是上海医科大学的孙光星等［5］，其方法与前不同的是利用了有机溶剂分离沉淀法。首先将块茎洗净去皮用生理盐水匀浆，离心所得上清液冷却至 4℃后，加入 2 倍体积 4℃ 丙酮进行沉淀；所得粗蛋白溶解于0.9%NaCl 溶液后，在 4℃ 下对蒸馏水透析 48 h，离心除去沉淀得上清液；最后用冰冻真空干燥得到半夏蛋白。

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