半夏蛋白及其基因研究进展(3)

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  王克夷等[6]在陶宗晋的方法基础上,用固定化猪甲状腺球蛋白柱亲和层析,从一次结晶的三叶半夏蛋中得到了纯化的半夏蛋白。经分析表明此种蛋白与陶宗晋所得的半夏蛋白相似,具有很好的凝血活性,并称之为半夏凝集素(Pinellia ternate lectin, PTL)。

  2  半夏蛋白的一般性质
   
  目前,主要采用凝胶渗透色谱分析、光谱测定、SDS-聚丙烯酰胺凝胶、圆二色性等技术对半夏蛋白的成分结构和性质进行了的研究。研究表明半夏蛋白的分子量约为44 kD,含有两个色氨酸,两个酪氨酸和一对二硫键;它可以解聚成四个亚基,各亚基之间以氢键彼此连接维持稳定的构象,其 N- 端存在着多个氨基酸残基,不含己糖。从掌叶半夏中提取的半夏蛋白却含有 18 种氨基酸,其中天冬氨酸含量高,半胱氨酸含量较低,氨基末端为丙氨酸,其pI值在 4.3 至 8.15 之间,具有较强的热稳定性和抗酶解能力[3,4,7]。
   
  半夏蛋白中 α- 螺旋含量较少,β- 折叠和 β- 转角含量较多,一定浓度的 SDS 能使 α- 螺旋的含量急剧增加,认为是它们构成了半夏蛋白的主要骨架。6 mol/L 盐酸胍可使半夏蛋白解聚,又可以用递减式分步透析法使变性解聚的半夏蛋白重天然化,且重天然化的半夏蛋白分子大小、亚基结构、肽键构型和生物活性也保持不变[7,8]。
   
  半夏蛋白的紧密结构及晶体结构是由分子中的氢键、二硫键、范德华力等多种次级键共同维系的,故具有较强的热稳定性和抗酶解能力。然而,半夏蛋白的真实空间构象与功能的关系,各亚基在聚集体中的空间排列以及亚基之间的接触位点和作用等诸多的问题还需更深入的研究。

  3  半夏蛋白的生物学功能

  3.1  半夏蛋白的凝集活性半夏蛋白具有凝血和凝集细胞的生物活性,且存在着种属专一性和细胞类别专一性。半夏蛋白只能凝集羊、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等红细胞,对人、猪、猴、龟、蟾蜍、鳝的红细胞不具凝集作用,且对不同动物的凝集滴度存在着细小的差别。半夏蛋白也能与许多细胞结合,但只对小鼠脾细胞、艾氏腹水癌和腹水型肝癌细胞有较强的凝集作用[9]。

  3.2  半夏蛋白的糖结合专一性半夏蛋白不能与半乳糖、藻岩糖、葡萄糖或它们的聚合糖结合,只与甘露糖及其聚合物具有专一结合。半抗原抑制实验证实半夏蛋白只对甘露糖和含有寡聚甘露糖苷核心的甲状腺球蛋白有抑制作用。半夏蛋白与甘露糖结合活性也不受常见的金属离子、EDTA 的影响,但 K+可明显增加其活性;大多数单糖、二糖也不抑制其活性,但受一些疏水配基形成的糖苷抑制[6,10]。
   
  因此,半夏蛋白可以作为一种探针来研究细胞膜上特定的糖基,也可以将其与荧光素、生物素、酶、胶体金和铁蛋白等示踪物结合,从而在光镜或电镜水平显示其结合部位进行标记等等。笔者认为半夏蛋白将会在细胞分化和成熟标记、细胞特殊类型的标记如肿瘤组织源性的标记、肿瘤特异性诊断的标记、肿瘤恶化的标记和不同肿瘤的分化标记等研究中发挥巨大的作用。

  3.3  半夏蛋白的抗早孕活性早在 16 世纪末,我国明朝李时珍的《本草纲目》中就有”半夏,孕妇忌之”,有“堕胎”的记载。早期的研究表明制半夏汤剂对大鼠妊娠和胚胎的毒性敏感时间为妊娠的早期和前中期,死胎的几率也显著增加。半夏毒性在小鼠 6~15 d内对胚胎的致畸作用最为明显,指出高剂量的用药直接导致胚胎畸形,其主要原因可能是半夏毒性影响了胚胎细胞生长因子,胚胎抗氧化剂的表达以及发生癌变等[11]。然而,先前的研究均是半夏入药,其药效成分的复杂性决定了半夏抗生育成分无法确定,给半夏抗生育机制的研究带来了相当大的困难。

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