高产果胶酶菌株的筛选鉴定及其发酵条件研究_陈勇强

第2期

2014年2月

第14卷

中国食品学报

JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnology

Vol．14No．2Feb．2014

高产果胶酶菌株的筛选鉴定及其发酵条件研究

陈勇强

严

芬

叶秀云

李仁宽

陈冬梅

林

娟

*

（福州大学生物科学与工程学院

摘要

福州350116）

采用观察透明圈与液态发酵测酶活相结合的方法，从腐烂的水果中筛选获得1株果胶酶产生菌G1。通

过形态观察与18SrDNA序列分析，鉴定菌株G1为黑曲霉。对G1菌株的发酵工艺进行优化，确定最佳培养基配方（g/L）：桔皮粉32，麸皮10，（NH4）2SO422，Na2HPO4·12H2O8.4，KH2PO41.4，MgSO4·7H2O1.0，CaCl20.1，··FeSO47H2O0.1，ZnSO47H2O0.1，培养基初始pH6.5；最佳发酵条件是：装液量50mL/250mL，转速180r/min，接种量9%（体积分数），32℃培养7d。在此条件下，果胶酶活力达到270.4U/mL，比优化前提高了8.7倍。关键词文章编号

果胶酶；黑曲霉；筛选鉴定；发酵工艺

1009-7848（2014）02-0138-08

果胶酶（pectinase）是指能催化分解果胶质的

1

1.1

材料与方法

试验材料菌种

来源于果园土壤与腐烂水果。

果胶、半乳糖醛酸，购自Sigma

主要试剂

1类酶的总称，包括原果胶酶、聚半乳糖醛酸酶、

果胶裂解酶和果胶酯酶等[1]。它在食品工业中应用非常广泛，如果汁澄清，提高果蔬出汁率，改善酒的色泽，增加酒的香气，提取生物活性功能成分，茶叶发酵的预处理等

[2-3]

1.1.1

1.1.2

公司；基因组DNA提取试剂盒、TaqDNA聚合酶、

。此外，果胶酶在饲料、环

250bpDNAmarker，购自TaKaRa公司；其余试剂

均为分析纯级。

保、纺织、发酵和洗涤等行业也有重要应用价值[4-6]。果胶酶主要来源于微生物的代谢产物，现已发现

1.1.3培养基

40多种微生物能产果胶酶，有曲霉属、青霉属、镰

孢属、克鲁维氏酵母以及某些兼性厌氧细菌等[7-9]。

利用微生物发酵生产果胶酶，因具有产能大、周期短、质量稳定、经济效益高等优点，故微生物是生产果胶酶的优良生物资源。我国是微生物资源大国，而目前国内生产的果胶酶酶活不理想，产量小，不能满足国内市场日益增长的需要。筛选果胶酶高产菌株及优化其发酵产酶的条件，是目前亟待研究和解决的问题。本文从自然界中筛选果胶酶高产菌株，并对其产酶培养基和发酵条件进行研究，以期为果胶酶的发酵生产打下基础。

1）富集培养基（g/L）：果胶2，（NH4）2SO43，Na2HPO4·12H2O4.2，KH2PO41.4，FeSO4·7H2O

·0.01，MgSO47H2O0.5，pH自然。

2）筛选培养基：在富集培养基基础上添加2%的琼脂。

3）查氏培养基[10]（g/L）：NaNO32，K2HPO41，

··KCl0.5，MgSO47H2O0.5，FeSO47H2O0.01，蔗糖

30，琼脂20，pH自然。

4）马铃薯培养基[10]（g/L）：马铃薯200，葡萄糖20，pH自然。固体马铃薯培养基（PDA）加琼脂20g。

5）基础发酵培养基（g/L）：桔皮粉12，（NH4）2SO4

··10，Na2HPO412H2O8.4，KH2PO41.4，MgSO47H2O

1.0，CaCl20.1，FeSO4·7H2O0.1，ZnSO4·7H2O0.1，pH自然。

1.2试验方法

1.2.1产果胶酶菌种的筛选初筛：取10g采集

样品于90mL无菌生理盐水中振荡30min，制成

收稿日期：2013-02-24

基金资助：福建省自然科学基金项目（2011J01218）；福建

省教育厅科技项目（JA10022）

作者简介：陈勇强，男，1986年出生，硕士生通讯作者：林娟

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