1.2 试剂
牛血清白蛋白（Roche），以水配成2.0×10-5 mol/L的储备溶液，4 ℃保存备用；18β－甘草次酸（GA，≥97%,Fluka, product of Spain）；槲皮素、金丝桃苷、芦丁、槲皮苷、山萘酚、大黄酸、大黄素对照品，购自中国药品与生物制品检定所（中国北京）；甲基莲心碱（由中南大学湘雅医院药剂科刘韶惠赠，HPLC纯度大于98％）；中药活性成分均以90%甲醇配成2.5×10-3 mol/L的溶液；pH 7.40的Tris-HCl缓冲溶液；Tris（淮安和元化工有限公司），氯化钠二水磷酸二氢钠（河南焦作），盐酸（湖南师范大学化学试剂厂）。除已标明者外，试剂均为分析纯；水为双重蒸馏水。
2 方法
2.1 光谱实验方法
2.1.1 荧光猝灭方法
在10 ml 容量瓶中依次加入2 ml 0.50 mol/L NaCl 溶液、2 ml pH 7.40 的Tris-HCl 缓冲溶液、2 ml BSA储备溶液，以水定容为10 ml, 摇匀, 在一定温度下静置30 min。取该溶液1 ml于石英比色皿中，依次加入一定体积的中药活性成分溶液（加入总量＜0.03 ml)，旋涡混匀。经指定温度下恒温放置3 min后，在280 nm的激发波长下，扫描290～420 nm荧光光谱。在相同条件下，测其紫外光谱。甘草次酸对中药活性成分的影响是在蛋白中先加入GA，然后按照上述方法进行。在实验条件下活性成分在290～450 nm范围内吸收很小，荧光内滤作用可以忽略，故直接对数据进行处理，结果为3次平行实验的平均值。
2.1.2 圆二色（CD）谱方法
光源系统用氮气保护(流量为5 L/min)，样品池的光径为0.1 cm。测量参数：扫描速率100 nm/min。分辨率0.1 nm，响应时间1 s，累积次数3次，扫描波段为190～250 nm，BSA浓度为2×10-6 mol/L，实验时向BSA中分别加入不同量的甘草次酸，混合均匀后测量，得到其CD谱。
2.2 毛细管电泳前沿分析（CE-FA）方法
CE运行缓冲是pH 7.40，67 mmol/L的磷酸钠，由适量的二水磷酸二氢钠溶解于水，然后在pH计上用2 mmol/L NaOH调节到指定的酸度，再经过0.45 μm滤膜过滤。BSA储备液（200 mmol/L）是通过溶解适量的BSA粉末于运行缓冲中得到，并于4度冰箱保存。工作蛋白由储备液用运行缓冲稀释而得。药物储备液（2 mmol/L）由运行缓冲配制，内含30％（V/V）以下甲醇。药物工作液由其储备液通过运行缓冲稀释而得，其中甲醇含量小于3％（V/V）。药物的标准溶液也用于配制其校准曲线，游离浓度由校准曲线求得。所有测试溶液在应用前进行脱气。
一系列BSA溶液中（20，30，35，40，45，50，55，60 μmol/L） ，加入等量的GA至 160 μmol/L，再加入缓冲至1 ml，涡旋混合30 s。然后在36℃水浴加热孵化2 h，再于室温下平衡2 h。若要进行超滤，则于室温平衡后进行，即取适量平衡液于超滤管，然后16 000 r/min下进行分离，滤液由CE进行测定。试样重复两份，结果取平均值，毛细管电泳在室温下进行。
新毛细管要做预处理，以1 mol/L HCl 冲洗30 min，水冲洗5 min，1 mol/L NaOH冲洗30 min，然后水冲洗5 min，磷酸盐缓冲冲洗15 min。为了获得较好的峰形和迁移时间的重现性，毛细管在每天实验开始按照下列程序进行冲洗和平衡：水冲洗2 min，1 mol/L氢氧化钠冲洗2 min，水冲洗2 min，缓冲冲洗5 min。
在每次测量之间，毛细管以水冲洗2 min，1 mol/L氢氧化钠冲洗2 min，水冲洗2 min，再以缓冲冲洗2 min。在这样的条件下，可以保证消除蛋白的吸附。平衡后的BSA-GA液或超滤液重力进样60 s（毛细管进出口高度差为30 cm）。运行电压为19 kV，常规极性运行，典型电流为85 mA，紫外检测波长为254 nm。
3 结果
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