黄芩苷是中药黄芩中提取的黄酮类有效成分。体内外的实验都证明它有显著的抗氧化性，减轻脑组织和心肌组织的缺血再灌注损伤［3］；能减少谷氨酸和过氧化氢对离体神经细胞的损害［4］；对局灶性脑缺血大鼠的神经功能有保护作用 ［5］。黄芩苷结构的特殊性使它能和金属离子产生强烈的螯合作用［6］。本研究探讨脑内注射铁剂制备帕金森病模型的可行性，同时观察黄芩苷对黑质部位注射铁剂所造成损毁的保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物分组、给药及处理健康雄性Wistar大鼠［购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）20070001］26只，体质量250～300 g，随机分为3组，模型组13只，黄芩苷组11只, 该组手术前灌胃黄芩苷(78mg·kg-1·d-1［7］，四川广汉市本草植化有限公司产品，批号：030812)1周。2只为假手术对照。模型组和黄芩苷组均施予FeCl3脑内定位注射，假手术组除注射外均与其他组相同处理。各组手术后饲养5周，期间记录大鼠行为学变化并拍摄摄像，实验结束时各组取2只做病理的动物麻醉后开胸，行多聚甲醛心脏灌注固定，24 h内制作中脑黑质部位冰冻切片（片厚50μm），以备做免疫组化分析和铁染色。其余动物断头处死，迅速冰盘上分离纹状体、中脑黑质、海马、大脑皮层及其余脑组织置-80℃保存。
1.2 黑质内定向注射FeCl3［2］大鼠用10%水合氯醛麻醉(0.35 ml/100 g)后固定于立体定位仪上，按照下列坐标将无菌FeCl3 溶液(20 mg/ml)，分为两点(每点1μl)缓慢注射至左侧黑质中：作标为①门齿棒上2.4 mm，前囟下4.4 mm，中线旁开1.1 mm，颅骨下7.9mm；②门齿棒下3.4 mm，前囟下4.0 mm，中线旁开0.8 mm，颅骨下8.1 mm。大鼠铁剂总量为40 μg。
1.3 黑质酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化染色各组做病理的大鼠脑切片在0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；室温入1N盐酸抗原修复30 min，蒸馏水浸洗3 min×3次；再入3%H2O2消除内源性过氧化物酶的活性10 min，蒸馏水浸洗3次， 0.01mol/L PBST浸洗0.5min×2 次；入5%正常羊血清封闭30 min，倾去血清后直入适当稀释的Ⅰ抗（大鼠单克隆TH抗体 ,sigma）室温过夜；0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；入1：300生物素标记的Ⅱ抗(羊抗小鼠IgG，北京中山金桥生物技术有限公司)室温23h，0.01 M PBS液中浸洗2 min×3次。入1:300辣根酶标记的链霉卵白素（Ⅲ抗）2～3h，再入0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次，每次；DAB显色10～30min。然后入水充分浸洗。裱片，自然干燥。
1.4 铁染色［7］脑切片置于含4%多聚甲醛的PB液中5 min，蒸馏水冲洗30s，新鲜配置的2% HCl与2%亚铁氰化钾等体积混合液30 min，PBS冲洗5 min×2次， 1% H2O2甲醇溶液20 min，PBS冲洗5 min×2次，DAB显色，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。
1.5 病理分析每只动物的多张脑切片，Nikon显微镜（ECLIPSE80i）下取3～4个黑质区域用NISElements 病理图像分析系统进行分析，数据均采用±s表示，统计分析采用SPSS 11.5进行，P＜0.05则具有统计学意义。
2 结果
2.1 行为学观察术后2～3 d，动物表现为头、身体向右侧倾斜，竖毛，有些出现对侧旋转或同侧旋转。有些伴有抽搐，进食和饮水减少，体重明显下降，当握住鼠尾提起时出现大鼠头朝向对侧弯曲身体。术后7 d左右，模型组的动物有不同程度的类帕金森病症状表现，震颤、弓背、身体向一侧倾斜，旋转，不能走直线；而黄芩苷组的动物较之模型组，以上症状均较轻。术后2～5周，各组动物均可以自主进食饮水，体重基本恢复到术前水平，身体仍向右侧倾斜,有些仍有弓背并不时伴有抽搐。黄芩苷组黑质注射铁剂后的死亡率降低（黄芩苷组36.36%，模型组46.15%）动物整体的状况有所改善。
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