体。因此，也称免疫印迹（immoublotting）。
1. 实验原理：
（1）将混合组分蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将各组分逐一分开停留在凝胶的不同区带
（2）通过转移电泳方法（与DNA，RNA转移方法不同）将凝胶板上的各组分蛋白质转移至NC膜上。
（3）用被检蛋白质相应的特异性抗体（称第一抗体）与NC膜上的各组分蛋白质进行免疫反应。于是，特异性抗体就与NC膜上相应的特异性蛋白质结合成抗原—抗体复合物。
（4）用与第一抗体相对应的特异性第二抗体，将它进行碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶标记或放射性核素标记。将这种标记的第二抗体与第一抗体—抗原复合物反应。于是标记了的第二抗体就与第一抗体进行特异性的结合。形成了三种物质的三元复合物。
（5）印迹信号的检测：
① 显色检测：加入相应的底物，在碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶的作用下，使底物反应产生具有一定颜色的物质。
② 放射性自显影检测：用于放射性核素标记信号的检测。
2.应用：
（1）蛋白质特别是微量蛋白质的定性检测：一复合物组分蛋白质中含有微量的目的蛋白质时，可用Western blotting 进行定性检测。
（2）特异蛋白质的半定量分析：特异蛋白质经蛋白质印迹质显色后，与标准量蛋白质比较，经扫描方法可进行半定量测定。
6、什么是斑点印迹（DNA点杂交）？什么是细胞原位杂交？
答：斑点印迹（dot blotting）:将待测DNA或RNA，不需经电泳分离直接点样在NC膜使之呈点状。再用标记的已知碱基顺序的探针与之杂交。如出现阳性杂交体，根据探针的碱基顺序，按碱基配对规则就可确定待测DNA或RNA的存在以及它们的含量。
细胞原位杂交（ISH，in situ hybridigation）：用组织切片或细胞涂片或细胞印片，对其进行一定处理，使细胞膜通透性增加，用标记的探针与之杂交，在细胞DNA原位置处形成杂交体。常用于肿瘤的基因诊断。
7、什么是PCR？基本原理是什么？
答：PCR (polymerase chain reaction) 称聚合酶链反应，是由美国生化学 Mullis 于1983年创建的方法。使一个基因片段在试管内经 2-3小时反应后，其拷贝数可增加至百万倍以上，不需要经复杂的分子克隆技术就可得到基因片段的大量拷贝，使得过去很多不能进行的分子生物学实验得以顺利进行。 PCR的基本原理
利用DNA半保留复制的原理结合体外DNA在不同温度下变性、复性的原理建立了高温变性、低温复性、适温（称延伸温度）下合成链延伸的三步连续反 应的不断循环：
1，高温变性：94℃左右时，双链DNA中两条单链之间氢键断裂，解开成两条单链，便于起模板作用，但又不影响3’，5’-磷酸二酯键的稳定性。此温度时，单链DNA引物自身间的聚合也完全解开，引物便于充分发挥作用。
2. 低温复性，便于DNA单链引物与单链模板DNA之间的结合：在55℃左右时，一对（两条）小DNA单链引物中，一条引物与一条模板链3‘端互补结合。另一
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