医学分子生物学复习思考题及答案(17)

定在NC膜上，将标记的核酸探针与之杂交，通过有无杂交信号（放射自显 影、化学发光等）而确定有无阳性杂交体，进而

确定有无目的DNA存在。

（4）DNA测序法：将分离的重组DNA进行DNA自动测序，与标准序列比较，能准确的鉴定目的DNA。

14、什么是亲和筛选法？

答：亲和筛选法：重组DNA表达出相应的蛋白质，它是抗原或抗体；配体或受体。将这种蛋白质吸附固定在NC膜上，将标记的抗原或抗体；受体或配体作为探针与被探测的蛋白质进行抗原—抗体，配体—受体反应。根据这种蛋白质杂交反应是阳性还是阴性，从而做出检测结果。

15、什么是原核表达体系？大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）表达载体应具备哪些条件？ 答：原核表达体系

原核表达体系与目前常用E.coli表达体系，其优点是培养方法简单，整个工艺过程经济方便。

（1）E.coli表达载体应具备下列条件：

① 含有可供筛选用的选择标志，如Ampr

② 具有强启动子：如 Lac启动子或其它的强启动子序列。这样能转录产生大量的mRNA

③ 含有合适的翻译调控序列：如核糖体结合位点，SD序列等

④含有合适的多克隆位点（MCS），这样保证目的基因按一定的方向与载体进行正确的连接。

16、什么是融合表达体系？有何优点？

答：表达多肽链的C端是克隆目的肽段的DNA编码，N端是原核标签肽的编码序列。这样，表达的蛋白质是由目的蛋白质多肽链及一段原核多肽链组成—称之为融合蛋白。

优点：

a、表达蛋白稳定，不易受细胞内源性蛋白酶的降解。

b、容易分离纯化：根据标签肽的特性，用亲和层析法分离融合蛋白，然后再水解出去标签肽，最后得到目的蛋白质。

17、什么是真核表达体系？真核表达载体具有的基本条件是什么？真核表达载体有何优点？

答：真核表达体系

（1）包括酵母、昆虫、哺乳动物细胞表达体系等

（2）真核表达载体除了与原核表达载体具有相似之处而外，如选择标记、启动子、转录及翻译终止信号。还应有自己特有的序列，如 mRNA polyA 加尾信号等。

（3）优点：真核表达体系的优点是

① 即可表达克隆cDNA，还能表达真核基因组DNA

② 能对表达的蛋白质进行适当的修饰

③ 表达蛋白质能恰当地分布在细胞内一定区域并积累。

18、重组ＤＮＡ技术在医学中有何应用？

答：重组DNA技术在医学中的应用：

一、生物制药：利用重组DNA技术生成有药用价值的蛋白质。如干扰素、胰岛素、乙肝疫苗、单克隆抗体等。

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