医学分子生物学复习思考题及答案(11)

条引物与另一条模板链两条3‘端互补结合。

3. 适温下DNA链合成延伸：在72℃左右时，在耐热DNApol（ Taq DNApol ）催化下，以四种dNTP为原料，从引物3’-OH上开始延长合成DNA

上述三步连续反应组成一轮（个）循环，上一轮循环的产物又可作为下一轮循环的模板。三步连续反应不断循环，经过 25-30 轮循环后，扩增基因片段的拷贝数可达到百万倍以上。扩增的DNA片段长度基本是两条引物 5’端之间的 DAN片段。

8、PCR引物应具备哪些条件？

答：1、PCR引物为一对（两条）DNA单链：其中一条引物与模板双链DNA中的一条模板单链的3’端相应部位碱基互补。另一条引物与另一条模板单链的3’端互补结合。

2、引物长度：约15-20个核苷酸。

3、引物与模板DNA非扩增区不应该存在碱基互补，否则，将产生一些非特异性的扩增产物。

4、引物的 3’端碱基，一定要与模板互补，否则将不产生延伸效应。

5、引物的 5’端碱基与模板的互补要求不十分严格，甚至可游离十几个碱基而不影响 PCR 扩增反应。

6、PCR扩增片段长度：复性时两条引物 5’端之间的DNA片段。

9、PCR的主要用途有哪些？试述之。

答：（一）获得目的基因，用于目的基因的克隆

根据目的基因两端的碱基顺序，设计合成一对引物从基因组DNA 或 cDNA中进行 PCR扩增，获得目的基因片段。

（二）体外基因定点突变

根据对突变的要求（点突变、缺失突变等）设计合成相应的突变引物，然后进行分段PCR扩增，最后将分段扩增产物再融合扩增。于是定点突变（引物）就嵌入到基因组中。

（三）对微量DNA及RNA进行分析

在PCR未出现之前，由于微量DNA信号太弱，不易进行分析 。PCR具有高度敏碱性，微量DNA（哪怕是一滴血或一根头发中的一个DNA分子）经PCR扩增后可得到基因的大量拷贝，便于进行定性及定量分析。这在基因诊断、法医中犯罪对象认定及亲子鉴定等方面，都有广泛的应用前景。

（四）DNA序列测定

从基因组DNA经PCR扩增得相应的目的DNA片段后，通过DNA自动测序仪或手工操作法进行DNA直接测序。也可用核酸杂交等方法进行间接测序。

（五）基因点突变分析

1，引物特异性PCR

2，PCR-SSCP（单股链构象多态性）

3，等位基因特异性寡核苷酸探针分析(PCR-ASO)

4，基因芯片技术

10、什么是引物特异性PCR？什么是PCR—ASO？

答：（1）、引物特异性PCR：从基因组DNA经PCR扩增得到目的基因，针对目的基因突变点的碱基性质设计合成 3‘ 端与之互补的引物，又进行PCR扩增，于是，突变阳性的基因有扩增产物，突变阴性的基因，没有扩增产物，称之为引物特异性PCR。等位基因特异性寡核苷酸探针分析(PCR-ASO)：

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