医学分子生物学复习思考题及答案(14)

3’—GACGTC—5’

②平头末端（钝性末端） ：在识别的碱基部位，对称地平齐切开DNA双链。如Sma Ⅰ

5‘—CCCGGG—3’

3’—GGGCCC—5’

3、什么是同尾酶？什么是同裂酶？

答：有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，这些酶彼此互称为同尾酶（isocaudarner）。所产生的相同的粘性末端称为配伍末端。

来源不同的限制性内切酶酶，但能识别和切割同一序列，这些酶称同裂酶或异源同工酶。

4、什么是基因载体？

答：基因载体：外援目的基因一般很难自由进入受体细胞内，即使能进入，也很难在受体细胞内进行复制和表达。为此，就要寻找一种特殊结构的DNA分子,它既能将外源目的基因带入受体细胞内，还能引导目的基因在受体细胞内进行复制和表达，称此特殊的DNA分子为基因载体，简称载体（vector）。根据载体功能不同又分为克隆载体（cloning vector）及表达载体（expression）。

5、什么是克隆载体？它具有哪些基本特点？

答：克隆载体是用来在宿主细胞中获得目的基

因的大量拷贝。

克隆载体应具备的基本特点

（1）具有复制起始点：它能使载体在宿主细胞内进行自主复制，同时能使带入的外源目的DNA片段进行同步复制扩增。

（2）含有可供筛选用的选择标志（selection marker）常称遗传标志，便于对阳性转化细胞进行筛选。重组DNA转化受体细胞时，并非每个细胞都转化成功，对转化成功的细胞进行筛选，就依赖这些选择标志。

（3）含有一个或多个限制性内切酶的单一酶切位点，便于目的基因插入。若载体中某一段特异核苷酸序列，含有多种限制性内切酶（RE）的单一酶切位点，称这段序列为多克隆位点（MCS,multiple cloning sites）。

6、什么是表达载体？什么是原核表达载体？它的基本特点是什么？

答：表达载体是用来在宿主细胞中表达外源目的基因。根据表达宿主细胞不同，又分为原核表达载体（prokaryotic expression vector）及真核表达载体（eukaryotic expression vector）。

原核表达载体是用于在原核细胞中表达外源目的基因。它是由克隆载体发展而来。除了具有克隆基因载体的一些特点而外，还需具有调控外源目的基因进行转录和翻译的一些调控序列、转录终止序列等。

7、什么是真核表达载体？它具有哪些特点？

答：真核表达载体

这类载体用于在真核细胞中表达外源目的基因，它也是由克隆载体发展而来，除了具有克隆载体的特点外，还应具有如下的特点：

① 它应具有真核表达的相应调控元件，包括增强子、启动子、转录终止信号、polyA 加尾信号等

② 具有真核细胞复制起始序列（富含AT序列）

③ 用于真核细胞阳性克隆筛选的筛选标志，常是药物抗性基因，如TryⅠ基

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